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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
31
- 英文名:
Cytochalasin A
- CAS号:
14110-64-6
- 供应商:
上海莼试
- 保存条件:
Store at -20°C
- 规格:
1mg 5mg 10mg
规格:1mg 5mg 10mg
CAS:14110-64-6
别名:N/A
化学名:N/A
Cytochalasin A分子式:C29H35NO5
分子量:477.6
溶解度:DMF: 30 mg/ml,DMF:PBS (pH 7.2) (1:20): 0.05 mg/ml,DMSO: 20 mg/ml,Ethanol: 20 mg/ml
储存条件:Store at -20°C
General tips:For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断!
| 产品名称 | Cytochalasin A | 产品货号 | CS-01Y64555 |
| 规格 | 1mg 5mg 10mg | CAS号 | 14110-64-6 |
| 含量 | >98.00% | 分子式 | C29H35NO5 |
| 分子量 | 477.6 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
The cytochalasins are cell-permeable fungal metabolites which inhibit actin polymerization. This interferes with such diverse processes as cell movement, growth, phagocytosis, degranulation, and secretion. Cytochalasin A is an oxidized analog of cytochalasin B which uniquely inhibits HIV-1 protease (IC50 = 3 μM). Cytochalasins A and B differ from other cytochalasins in being able to rapidly and reversibly inhibit glucose transport by competitively binding glucose transporters (Ki = 4.0 and 0.6 μM, respectively). Cytochalasin A also induces the phosphorylation of the tyrosine phosphatase PTP3 of Dictyostelium, activating STATc.
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品:
| (Trp¹¹)-Neurotensin | CARIPORIDE |
| Carisbamate | 周期素依赖性激酶4(CDK4)ELISA试剂盒 |
| CARM1-IN-1 | 周期素依赖性激酶2(CDK2)ELISA试剂盒 |
| CARM1-IN-1 hydrochloride | 重肽铁蛋白(FTH)ELISA试剂盒 |
| Carmofur | 周期素依赖性激酶1(CDK1)ELISA试剂盒 |
| Carmustine | 肿廇蛋白P63(TP63)ELISA试剂盒 |
| Carnosic acid | 肿瘤易感基因101(TSG101)ELISA试剂盒 |
| Carnosol | 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配(TRAIL)ELISA试剂盒 |
| Caroverine hydrochloride | 周期素依赖性激酶6(CDK6)ELISA试剂盒 |
| Carpaine | 周期素依赖性激酶7(CDK7)ELISA试剂盒 |
| Carprofen | 周期素依赖性激酶8(CDK8)ELISA试剂盒 |
| CART (55-76) (rat) | 周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒 |
| CART (61-102) (human, rat) | Cytochalasin A周期素依赖性激酶抑制因子3(CDKN3)ELISA试剂盒 |
| Celgosivir (MBI 3253) | 轴突蛋白1(NRXN1)ELISA试剂盒 |
| 人天冬酰胺酶ELISA试剂盒 | 轴突蛋白2(NRXN2)ELISA试剂盒 |
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文献和实验C29 H37 NO3 。从真菌类 Helminthosporium de- mariodeum中分离得到的代谢产物。是以希腊语的 cytos(细胞)和 chalasis(松弛)组合而命名的。在许多动植物细胞的细胞运动中,特别是可逆地抑制同微丝系有关的现象。例如在 0.5— 1.0微克/毫升浓度下作用 24小时,会使鼠的培养纤维芽细胞只进行核分裂,而细胞质的分裂受到抑制,从而成为多核细胞。 5微克/毫升可阻止蛙的受精卵的卵裂沟的形成,致使不能进行正常的卵裂,也抑制
Preparation of cytoplasmic extracts for the application in a cell-free system
(without Cytochalasin B). Resuspend cells in about 1 volume (same volume as cell pellet) of KPM (containing 10 µg/ml Cytochalasin B). Lyse the cells by freezing the cell-suspension in liquid nitrogen and successively thawing them in a warm water bath. Repeat
Isolation of cell nuclei for the application in the cell-free system
Posted on Monday, November 24, 2003 Description Pretreatment of epithelial cells with 20 µM Cytochalasin B for 30 min in RPMI prior to harvesting results in the reduction of cytoskeletal microfilaments and the easier release of the nuclei
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