- ￥600 - 3200
- 上海莼试
- CS-01Y63857
- 国产
- 2025年10月29日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
25
- 英文名：
Arphamenine B (hemisulfate)
- CAS号：
144110-38-3
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
Store at -20°C
- 规格：
1mg 5mg 10mg
本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！
产品描述:
Arphamenine B is a specific inhibitor of aminopeptidase B first isolated from bacteria [1]. Aminopeptidase B (Ap-B) is a Zn2+-dependent exopeptidase which selectively removes Arg and/or Lys residues from the N terminus of several peptide substrates. Aminopeptidase B has been involved in processing events occurring either during its intracellular transport along the secretory pathway or at the plasma membrane level [2].In vitro: Arphamenine B inhibited the activity of aminopeptidase enzyme with an IC50 value of 9.0 μM [2]. Arphamenine B strongly inhibited transport by the oligopeptide/H+ symporter with the EC50 values of 15 to 67 μM. Arphamenine at concentration 100 μM acted as either ineffective or weak inhibitor of membrane-associated hydrolysis [4]. Arphamenine selectively suppressed dipeptide hydrolysis [4].References:[1] Umezawa H, AOYAGI T, OHUCHI S, et al. Arphamenines A and B, new inhibitors of aminopeptidase B, produced by bacteria[J]. The Journal of antibiotics, 1983, 36(11): 1572-1575.[2] Balogh A, Cadel S, Foulon T, et al. Aminopeptidase B: a processing enzyme secreted and associated with the plasma membrane of rat pheochromocytoma (PC12) cells[J]. Journal of Cell Science, 1998, 111(2): 161-169.[3] Sajid M, Isaac R E, Harrow I D. Purification and properties of a membrane aminopeptidase from Ascaris suum muscle that degrades neuropeptides AF1 and AF2[J]. Molecular and biochemical parasitology, 1997, 89(2): 225-234.[4] Daniel H, Adibi S A. Functional separation of dipeptide transport and hydrolysis in kidney brush border membrane vesicles[J]. The FASEB journal, 1994, 8(10): 753-759.
化学性质:
规格：1mg 5mg 10mg
CAS：144110-38-3
别名：
化学名：αR-[(3S)-3-amino-6-[(aminoiminomethyl)amino]-2-oxohexyl]-4-hydroxy-benzenepropanoic acid, hemisulfate
分子式：
分子量：385.4
溶解度：≤0.2mg/ml in DMSO
储存条件：Store at -20°C
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)Arphamenine B (hemisulfate)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品:
| 产品名称 | Arphamenine B (hemisulfate) | 产品货号 | CS-01Y63857 |
| 规格 | 1mg 5mg 10mg | CAS号 | 144110-38-3 |
| 含量 | >98.00% | 分子式 | |
| 分子量 | 385.4 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
Arphamenine B is a specific inhibitor of aminopeptidase B first isolated from bacteria [1]. Aminopeptidase B (Ap-B) is a Zn2+-dependent exopeptidase which selectively removes Arg and/or Lys residues from the N terminus of several peptide substrates. Aminopeptidase B has been involved in processing events occurring either during its intracellular transport along the secretory pathway or at the plasma membrane level [2].In vitro: Arphamenine B inhibited the activity of aminopeptidase enzyme with an IC50 value of 9.0 μM [2]. Arphamenine B strongly inhibited transport by the oligopeptide/H+ symporter with the EC50 values of 15 to 67 μM. Arphamenine at concentration 100 μM acted as either ineffective or weak inhibitor of membrane-associated hydrolysis [4]. Arphamenine selectively suppressed dipeptide hydrolysis [4].References:[1] Umezawa H, AOYAGI T, OHUCHI S, et al. Arphamenines A and B, new inhibitors of aminopeptidase B, produced by bacteria[J]. The Journal of antibiotics, 1983, 36(11): 1572-1575.[2] Balogh A, Cadel S, Foulon T, et al. Aminopeptidase B: a processing enzyme secreted and associated with the plasma membrane of rat pheochromocytoma (PC12) cells[J]. Journal of Cell Science, 1998, 111(2): 161-169.[3] Sajid M, Isaac R E, Harrow I D. Purification and properties of a membrane aminopeptidase from Ascaris suum muscle that degrades neuropeptides AF1 and AF2[J]. Molecular and biochemical parasitology, 1997, 89(2): 225-234.[4] Daniel H, Adibi S A. Functional separation of dipeptide transport and hydrolysis in kidney brush border membrane vesicles[J]. The FASEB journal, 1994, 8(10): 753-759.
化学性质:
规格：1mg 5mg 10mg
CAS：144110-38-3
别名：
化学名：αR-[(3S)-3-amino-6-[(aminoiminomethyl)amino]-2-oxohexyl]-4-hydroxy-benzenepropanoic acid, hemisulfate
分子式：
分子量：385.4
溶解度：≤0.2mg/ml in DMSO
储存条件：Store at -20°C
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)Arphamenine B (hemisulfate)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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