KU-32

化学性质:   

 
规格：250mg 500mg
CAS：956498-70-7
别名：N/A
化学名：N/A
KU-32分子式：C20H25NO8

分子量：407.41
溶解度：Soluble in DMSO
储存条件：Store at -20°C
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the   ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or   blue ice upon request
本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！

产品名称	KU-32	产品货号	CS-01Y64252
规格	250mg 500mg	CAS号	956498-70-7
含量	>98.00%	分子式	C20H25NO8
分子量	407.41	用途	仅供科研研究使用

产品描述: 

 
KU-32 is a novel, novobiocin-based Hsp90 inhibitor that can protect against neuronal cell death.Treating human islets with KU-32 for 24 hours shows no toxicity. With a minimum of 2-day exposure, KU-32 improves cellular viability by blocking apoptosis. Functionally, isolated human islets release more glucose-stimulated insulin when preincubate in KU-32[1]. KU-32 protects against glucose-induced death of embryonic DRG (dorsal root ganglia) neurons cultured for 3 days in vitro[2].Diabetic BKS-db/db mice, a model for type 2 diabetes, administered KU-32 for 10 weeks do not show any significant changes in blood glucose and insulin levels, despite having greater insulin staining/beta cell in the pancreas compared to untreated BKS db/db mice[1].[1]. Farmer K, et al. KU-32, a novel drug for diabetic neuropathy, is safe for human islets and improves in vitro insulin secretion and viability. Exp Diabetes Res. 2012;2012:671673. [2]. Urban MJ, et al. Inhibiting heat-shock protein 90 reverses sensory hypoalgesia in diabetic mice. ASN Neuro. 2010 Aug 11;2(4):e00040.
使用方法: 

 
1. 常用筛选浓度
　　注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
　　一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
　　注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
　　注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤: 

 
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品: 

 

H-Gln-pNA	α-Linolenic Acid
Peldesine dihydrochloride	人前列腺素D合成酶(PGDS)ELISA检测试剂盒
TG100-115	人胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA Kit
LX2343	人尿激酶型纤溶酶原激活物受(PLAUR/uPAR)试剂盒 ELISA
Saccharin 1-methylimidazole (SMI)	人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒
Pseudomonic Acid (lithium salt)	人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA检测试剂盒
PIP-199	人血管生成素受/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA Kit
OSU-03012 (AR-12)	人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒
Rifaximin (Xifaxan)	人前列腺素D合成酶(PGDS)试剂盒 ELISA
MK-8776(SCH-900776)	人前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA试剂盒
NHC-diphosphate	人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA Kit
Tideglusib	人神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA检测试剂盒
T-00127_HEV1	KU-32人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)试剂盒 ELISA
7-O-Demethyl rapamycin	人基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒
人连蛋白ELISA试剂盒	人基质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA Kit