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文献和实验【求助】Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒的使用
mmsong1987 我买了Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒,想研究某种材料的细胞毒性,看其是否会诱导细胞凋亡。之前做过MTT之类的检测,结果显示材料基本无毒性。 由于条件限制(流式细胞仪在我们学校另一个校区)不能及时进行检测,前两天进行了一次实验,是将细胞收集后拿到测试地点再进行的荧光染色处理,检测结果显示阴性对照组没有加材料处理的细胞也多处于凋亡状态,个人猜测可能跟细胞在路上耽误的时间有关(悬浮在Annexin V结合液中
膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。 图Annexin V 检测细胞凋亡原理二、试剂盒组份
Q:Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么? A:Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合,将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,核染料 PI 或 7-AAD
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