Recombinant Human LIN28B

● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2508	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	5-250
分子量	47.3 kDa	标签	N-terminal His-IF2DI Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：CSDD 2, CSDD2, FLJ16517, Lin 28 homolog B (C. elegans), Lin 28.2, Lin-28B, LIN28B, LN28B_HUMAN, Protein lin-28 homolog B  纯度 Greater than 90% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
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布氏菌选择性培养基  Selective Medium 250 用于布氏菌的选择性分离培养  HCV-Core 丙型肝炎病毒-C区(多肽 1mgHCV-Core 丙型肝炎病毒-C区(多肽)
YM肉汤250g/瓶用于霉菌、酵母菌和其它耐酸菌的培养incubationmediaYM肉汤250g/瓶用于霉菌、酵母菌和其它耐酸菌的培养  CDK16重组人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 标签) Protein
LactoseBroth  CCL1 Protein Human 重组人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白
Nitrogen-fixingbacteriawiththeASugai’smedium  CD6 Protein Mouse 重组小鼠 CD6 / TP120 蛋白 (His 标签)
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PALCAMAgar  ISG15重组人 ISG15 / G1P2 蛋白 Protein
Sabouraud'sAgar，Modified  CCL11 Protein Human 重组人 CCL11 蛋白 (His 标签)
培养基P250g用于梭菌的增菌培养和计数。  SELL Protein Mouse 重组小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His 标签)
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十六烷基溴化铵培养基 100g 用于绿脓杆菌及其它革兰氏阴性非发酵菌的选择性分离培养(GB15979-2002，化妆品卫生规范微生物检验...  Ractopamine/KLH 莱克多巴胺与血蓝蛋白偶联物 1mgRactopamine/KLH 莱克多巴胺与血蓝蛋白偶联物
气单胞菌鉴别琼脂AeromonasDifferentialAgar用于分离培养和鉴别气单胞菌  GFRA2重组人 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 蛋白 (His 标签) Protein
BifiacteriumBSMedium  CCL13 Protein Human 重组人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 标签)
葡萄糖胰蛋白胨琼脂250g用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数,平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)  ESAM Protein Human 重组人 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白
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LIM培养基 LIM Medium 250 用于链球菌的分离培养(Japan方法)  CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 0.5mgCGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 ) 软骨糖蛋白39(多肽)
Recombinant Human LIN28B葡萄糖铵琼脂培养基250g/瓶用于志贺氏菌生化试验incubationmedia葡萄糖铵琼脂培养基250g/瓶用于志贺氏菌生化试验  PLAU重组人 Urokinase / PLAU (activated by trypsin) 蛋白 (His 标签) Protein
ContactPlateMedium  CCL14 Protein Human 重组人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (aa 28-93, His 标签)
LactoseBroth  LCN2 Protein Mouse 重组小鼠 LCN2 / NGAL 蛋白 (His 标签)