Recombinant Human IDH1

● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2308	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	341-414
分子量	28.9 KDa	标签	N-terminal His-IF2DI Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：Cytosolic NADP-isocitrate dehydrogenase; EC 1.1.1.42; IDCD; IDH; IDH1; IDP; IDPC; isocitrate dehydrogenase [NADP] cytoplasmic; isocitrate dehydrogenase 1 (NADP+), soluble; Isocitrate Dehydrogenase 1; NADP(+)-specific ICDH; NADP-dependent isocitrate dehydrogenase, cytosolic; NADP-dependent isocitrate dehydrogenase, peroxisomal; Oxalosuccinate decarboxylase; PICD  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
Legionella BCYE alpha-growth supplement 军团杆菌CYEa-生长添加剂 1.10240.0001 MERCK默克 incubation media Legionella BCYE alpha-growth supplement 军团杆菌CYEa-生长添加剂 1.10240.0001 MERCK默克  IFNW1重组人 Interferon omega-1 / IFNω / IFNW1 蛋白 (Fc 标签) Protein
多粘菌素B(氯多粘菌素B肉汤冻干配套试剂) 25000IU/支x10 每支添加于100ml(025081)中配成氯多粘菌素B肉汤。  视黄醇结合蛋白1(RBP1)重组蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 1, Cellular (RBP1)
食蟹猴骨髓间质干细胞成软骨诱导分化培养基Cynomolgusmonkeybonemarrowmesenchymalstemcellstothedifferentiationmediumtoinducecartilage  CSF2重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白 Protein
疱肉牛肉粒 100g 加入疱肉基础，配成疱肉培养基  DLL1 Protein Human 重组人 DLL1 / Delta-1 蛋白 (His 标签)
AcidL-GMediumBase  HA Protein H9N2 重组甲型流感 H9N2 (A/Guinea fowl/Hong Kong/WF10/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
Legionella Combi-Pack 军团杆菌复合包 1.10425.0001 MERCK默克 incubation media Legionella Combi-Pack 军团杆菌复合包 1.10425.0001 MERCK默克  LEPR重组人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
亚碲酸(庆大霉素琼脂冻干配套试剂) 2.5mg/支x10 每支添加于500ml(025050)中配成庆大霉素琼脂培养基。  糖原合酶激酶3α(GSK3α)重组蛋白 Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)
恒河猴骨髓间质干细胞成软骨诱导分化培养基BonemarrowmesenchymalstemcellsintoGangesRIvermonkeydifferentiationmediumtoinducecartilage  CNPY3重组人 CNPY3 / PRAT4A / ERDA5 蛋白 (Fc 标签) Protein
DriedMeatParticle  DLL4 Protein Human 重组人 DLL4 / Delta4 蛋白 (His 标签)
无淀粉改良罗氏培养基250g用于结核杆菌分离培养  HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
Legionella CYE agar basis 军团杆菌CYE琼脂基础 1.10242.0001 MERCK默克 incubation media Legionella CYE agar basis 军团杆菌CYE琼脂基础 1.10242.0001 MERCK默克  EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 标签) Protein
改良纤维二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)琼脂基础冻干配套试剂 10支 每支添加于50ml 025110改良纤维二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)琼脂基础。  热休克蛋白40(HSP40)重组蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 40 (HSP40)
恒河猴骨髓间质干细胞成软骨诱导分化培养基BonemarrowmesenchymalstemcellsintoGangesRIvermonkeydifferentiationmediumtoinducecartilage  EVI2A重组人 EVI2A 蛋白 (Fc 标签) Protein
CookedMeatMediumBase  DMBT1 Protein Human 重组人 DMBT1 / Muclin 蛋白 (His 标签)
碱性L-G培养基基础250g用于酸性物质处理的结核杆菌标本  HA Protein Influenza B 重组乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)
Legionella GVPC selective supplement 军团杆菌GVPC选择添加剂 1.10241.0001 MERCK默克 incubation media Legionella GVPC selective supplement 军团杆菌GVPC选择添加剂 1.10241.0001 MERCK默克  ESAM重组小鼠 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白 (His 标签) Protein
Recombinant Human IDH1亚碲酸(琼脂冻干配套试剂) 5mg/支x10 每支添加于500ml(025030)中配成琼脂培养基。  补体1抑制因子(C1INH)重组蛋白 Recombinant Complement 1 Inhibitor (C1INH)
食蟹猴骨髓间质干细胞成软骨诱导分化培养基Cynomolgusmonkeybonemarrowmesenchymalstemcellstothedifferentiationmediumtoinducecartilage  DCTPP1重组人 XTP3TPA / DCTPP1 蛋白 (His 标签) Protein
消毒灭菌效果评价培养基  DMP1 Protein Human 重组人 DMP1 蛋白 (His 标签)
Urea-EggYolkdoublesugarMedium  PDGFRB Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 PDGFRB / PDGFR-1 蛋白 (His 标签)