Recombinant Human HSP90A

● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2284	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	381-732
分子量	61.6 KDa	标签	N-terminal His-IF2DI Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：FLJ31884; Heat shock 86 kDa; heat shock 90kD protein 1, alpha; heat shock 90kD protein 1, alpha-like 4; heat shock 90kD protein, alpha-like 4; heat shock 90kDa protein 1, alpha; heat shock protein 90kDa alpha (cytosolic), class A member 1; heat shock protein HSP 90-alpha; Hsp89; HSP90; HSP90AHSP86; HSP90N; HSPC1HSP 86; HSPCAHSP89A; HSPCAL1; HSPCAL4; HSPN; LAP2; Renal carcinoma antigen NY-REN-38  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
M63 Broth-capsule 培养基 5capsules incubation media M63 Broth-capsule 培养基 5capsules  PLAU重组人 Urokinase / PLAU 蛋白 (His 标签) Protein
乙型溶血性链球菌 5102-1与Volidamycin、井冈霉素相似，对水稻纹枯病、稻小球菌核病，棉花立枯病有。 支/瓶  无翅型MMTV整合位点家族成员2(WNT2)重组蛋白 Recombinant Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 2 (WNT2)
M-Endo肉汤250g用于滤膜法计数水中大肠菌群  IFNA2重组人 Interferon alpha 2 / IFNA2 蛋白 Protein
MiddleBrook7H10Agar  EFNB1 Protein Human 重组人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 标签)
改良纤维二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)琼脂基础2550g用于创伤弧菌的选择性分离培养(GB/T4789.-2008)。  HA Protein H9N2 重组甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
M9 Broth 培养基 250g incubation media M9 Broth 培养基 250g  RELT重组人 RELT / TNFRSF19L 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
洋葱曲霉 支/瓶  胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4 (IGFBP4)
双料月桂基盐胰蛋白胨肉汤(LST)250g用于大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB、SN标准)  HA重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein
气单胞菌鉴别琼脂 250g 用于分离培养和鉴别气单胞菌  EFNB1 Protein Human 重组人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 标签)
3%氯三糖铁琼脂255于鉴别副溶血性弧菌的生化反应(GB/T4789.7-2008和SN02)。  C. PERFRINGENS NA Protein C.perfringens 重组产气荚膜梭菌 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 标签)
M9 Broth-capsule 培养基 5capsules incubation media M9 Broth-capsule 培养基 5capsules  CX3CL1重组狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (Fc 标签) Protein
氧化微杆菌 支/瓶  NPY ( Neuropeptide Y 0.5mgNPY ( Neuropeptide Y) 神经肽 Y(抗原)
消毒液中和肉汤250g用于中和醇类、酚类消毒剂、含氯消毒剂、含消毒剂、过氧化物消毒剂、季铵盐类消毒剂、醛类消毒剂等  TREM1重组人 TREM1 蛋白 (His 标签) Protein
AeromonasDifferentialAgar  EFNB2 Protein Human 重组人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白
Cary-Blair氏运送培养基(不含琼脂)2509g用于含微生物样品的采集、运送和保存，特别是空肠弯曲菌、菌、副溶血性弧菌、沙门氏菌和志...  CHL1 Protein Mouse 重组小鼠 CHL-1 蛋白 (Fc 标签)
M9CA Broth 培养基 250g incubation media M9CA Broth 培养基 250g  PIGR重组人 PIGR 蛋白 (365 Ser/Gly, His 标签) Protein
伊氏李斯特氏菌 支/瓶  无翅型MMTV整合位点家族成员1(WNT1)重组蛋白 Recombinant Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 1 (WNT1)
DisinfectantNeutralizationBroth  ITIH3重组人 ITIH3 蛋白 (His 标签) Protein
Recombinant Human HSP90AMiddleBrook7H11琼脂 250g 用于分枝杆菌的分离培养  EFNB2 Protein Human 重组人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 标签)
Cary-Blair氏运送培养基25090用于含微生物样品的采集、运送和保存，特别是空肠弯曲菌、菌、副溶血性弧菌、沙门氏菌和志...  NP Protein H1N1 重组甲型流感 H1N1 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) (His 标签)