Recombinant Human H-Ras G12V

商品属性：

货号	XG-DB2264	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-189
分子量	20.7 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：c-H-ras, CBAS/HAS, CHARAS1, cHras, CTLO, GTPase HRas, H-Ras-1, Ha-Ras, HAMSV, HaRas, HRAS, HRas1, HRASIDX, KRAS, N-terminally processed, NRAS, p21ras, RASH_HUMAN, RASH1, Transforming protein p21, vHaras Harvey rat sarcoma viral oncogene homolog  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
MRS 琼脂(MRSA) 250(g) incubation media MRS 琼脂(MRSA) 250(g)  EFNB1重组小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 标签) Protein
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BAT培养基 250g 用于检测果汁中耐热嗜酸菌  ERN1 Protein Human 重组人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977, His & GST 标签)
Fraser肉汤增菌液(FB)基础26080250g用于李斯特氏的选择性增菌培养(SN/T0-2005，ISO标准)。  CNTN3 Protein Rat 重组大鼠 Contactin 3 / CNTN3 蛋白 (His 标签)
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SimmonsCitrateAgar  CPNE1重组人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白 Protein
琼脂培养基L 250g 用于沙门氏菌的选择性分离培养  ERN1 Protein Human 重组人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977, His & GST 标签)
WLNMedium  IFNAR1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 (Fc 标签)
MRS 肉汤(MRS) 250(g) incubation media MRS 肉汤(MRS) 250(g)  EDA2R重组大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白 (His 标签) Protein
阪崎肠杆菌显色培养基 Enterobacter Sakazakii Chromogenic Medium 1升 用于坂崎杆菌的显色培养，坂崎杆菌显蓝色，其他肠杆菌显无色  GATA-3(GATA binding factor 3 0.5mgGATA-3(GATA binding factor 3) GATA结合蛋白3抗原
胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE)250用于单增李氏菌增菌培养(SN、GB标准)incubationmedia胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE)250用于单增李氏菌增菌培养(SN、GB标准)  CD300A重组人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白 (His 标签) Protein
GlucoseTryptoneAgar  ERP27 Protein Human 重组人 ERP27 蛋白 (Fc 标签)
BG250g用于蓝藻细菌培养  MMP8 Protein Mouse 重组小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白
MRSA显色培养基 用于耐甲氧西林球菌的分离和鉴定 1000ml incubation media MRSA显色培养基 用于耐甲氧西林球菌的分离和鉴定 1000ml  CSF1R重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
Recombinant Human H-Ras G12V拉曼被孢霉 支/瓶  通用转录因子ⅡH肽1(GTF2H1)重组蛋白 Recombinant General Transcription Factor IIH, Polypeptide 1 (GTF2H1)
改良EC(mEC+n)肉汤9ml*20支/包用于O择性增菌  NAPA重组人 NAPA / alpha-SNAP 蛋白 (His 标签) Protein
胆盐硫乳琼脂培养基 250g 肠道菌选择性培养基，特别是沙门氏菌的选择性分离  ESAM Protein Human 重组人 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白 (His 标签)
3%酶试剂2ml*20支用于细菌的酶试验  HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/duck/Hunan/795/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)
重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

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