Recombinant Human Melanoma Inh

商品属性：

货号	XG-DB2612	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	25-131
分子量	11.7 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：Cartilage derived retinoic acid sensitive protein, CD RAP, CDRAP, Melanoma derived growth regulatory protein precursor, Melanoma inhibitory activity protein, Melanoma-derived growth regulatory protein, Mia, MIA_HUMAN  纯度 Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
氏菌肠炎亚种 Cool Culture media testing preparatory test cool 支/瓶    PTPN2 PTPN2 / PTPT 蛋白 Protein
BoltonBrothSupplement    SECTM1 Protein Human  SECTM1 / K12 蛋白 (His 标签)
AC肉汤 250g 用于常见微生物增菌培养和不含防腐剂样品的无菌试验    IL1R1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL1R1 蛋白 (Fc 标签)
Bufferedglycerol-SodiumChlorideSolution    CLEC4M DC-SIGNR / CD299 / CLEC4M 蛋白 (Fc 标签) Protein
盐胱氨酸增菌液(SC) Selenite Cystine Broth 用于沙门氏菌选择性增菌培养(GB、SN标准)    胰多肽(PP)重组蛋白 Recombinant Pancreatic Polypeptide (PP)
月示胨 Proteose peptone 250 培养基原材料，为营养要求高的细菌生长提供营养    HA重组甲型流感 H2N2 (A/Canada/720/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein
Bolton肉汤基础250g/瓶用于弯曲菌选择性增菌，每培养基中添加070ubationmediaBolton肉汤基础250g/瓶用于弯曲菌选择性增菌，每培养基中添加0701    SELE Protein Human  E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (His 标签)
BDSMedium    EFNB2A Protein Danio rerio (zebrafish) 重组斑马鱼 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (His 标签)
葡萄糖天门冬素培养基250g葡萄糖天门冬素培养基    CSF1R CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His 标签) Protein
紫红胆盐葡萄糖琼脂 鉴定和计数食品及乳制品中的胆盐耐受型革兰氏阴性菌 500g incubation media 紫红胆盐葡萄糖琼脂 鉴定和计数食品及乳制品中的胆盐耐受型革兰氏阴性菌 500g    ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase 0.5mgALK Recombinant Human Melanoma Inhibitory Activity(Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag) 间变型淋巴瘤激酶(抗原)
肠膜明串珠葡萄聚糖亚种 支/瓶    SIGLEC5 SIGLEC5 蛋白 (Fc 标签) Protein
Bolton肉汤添加剂*5添加于HBJ007中    SELL Protein Human  CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His 标签)
ASS琼脂 250g 用于磺胺类灵敏度试验(WHO方法)    PVRL2 Protein Rat  CD112 / Nectin-2 / PVRL2 蛋白 (His 标签)