Recombinant Human hHR23b

商品属性：

货号	XG-DB2216	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-409
分子量	44.9 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：hHR 23b, hHR23B, HR 23B, HR23B, mHR 23B, mHR23B, p58, RAD 23B, RAD23 (S. cerevisiae) homolog B, RAD23 homolog B, RAD23 homolog B (S. cerevisiae), RAD23 yeast homolog of B, Rad23b, RD23B_HUMAN, UV excision repair protein RAD23 homolog B, XP C repair complementing complex 58 kDa, XP C repair complementing complex 58 kDa protein, XP C repair complementing protein  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
PYG液体培养基基础 PYG Broth Medium Base 用于双岐杆菌增菌培养，使用时需加入氯化血红素和维生素K1(GB标准)  DARS重组人 DARS 蛋白 (His 标签) Protein
哥伦比亚4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基 Columbia-MUG Medium 250克 大肠杆菌的荧光检测  STAT3(signal transducers and activators of transduction3 0.5mgSTAT3(signal transducers and activators of transduction3) 信号转导和转录激活因子3抗原
纤维素分解菌培养基250g/瓶用于纤维素分解菌的分离和鉴别，纤维素分解菌周围有红色分解圈incubationmedia纤维素分解菌培养基250g/瓶用于纤维素分解菌的分离和鉴别，纤维素分解菌周围有红色分解圈  YWHAE重组人 14-3-3 epsilon / YWHAE 蛋白 (GST 标签) Protein
粪肠球菌琼脂 250g 用于粪肠球菌的选择性分离  FZD10 Protein Human 重组人 Frizzled-10 / FZD10 蛋白 (Fc 标签)
Vibrioparahaemolyticusagar  SLITRK1 Protein Human 重组人 SLITRK1 蛋白 (His & Fc 标签)
PyridoxineYmedium  TBCB重组人 TBCB 蛋白 (His 标签) Protein
Candida Elective 琼脂 Candida Elective Agar to Nickerson 250 用于食品中Candida及酵母菌总数测定(Merck方法)  STAT5(signal transducers and activators of transduction5 0.5mgSTAT5(signal transducers and activators of transduction5) 信号转导和转录激活因子5(STAT5)抗原
Elek氏培养基250g/瓶用于致泻大肠埃希氏菌的毒素测定incubationmediaElek氏培养基250g/瓶用于致泻大肠埃希氏菌的毒素测定  YWHAB重组人 14-3-3 beta / YWHAB 蛋白 (GST 标签) Protein
SalmonellaShigellaAgar  FZD10 Protein Human 重组人 Frizzled-10 / FZD10 蛋白 (His 标签)
含225ml7.5%氯肉汤均质袋用于球菌的选择性增菌培养  SLITRK1 Protein Human 重组人 SLITRK1 蛋白 (His 标签)
PyridoxineYmedium  GP120重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp120 蛋白 (group M, subtype CRF07_BC) (His 标签) Protein
现隐肉汤 Presence Ance Broth 250 用于水中大肠菌群计数(US-EPA方法)  Tie2(Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2 0.5mgTie2(Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2) 上皮生长因子样域酪氨酸激酶2抗原
MS维生素500L/瓶用于制备MS培养基incubationmediaMS维生素500L/瓶用于制备MS培养基  CD74重组人 CD74 蛋白 (His 标签) Protein
PhosphateBufferedSaline  FZD4 Protein Human 重组人 Frizzled-4 / FZD4 / CD344 蛋白 (Fc 标签)
BYP琼脂培养基250g用于巴氏杆菌分离培养  LEFTY2 Protein Human 重组人 Lefty2 / Lefty A 蛋白 (Fc 标签)
R2A Agar incubation media R2A Agar  CST3重组人 Cystatin C / CST3 蛋白 (His 标签) Protein
Recombinant Human hHR23b短裙竹荪东北变种 支/瓶  前列腺素I合酶(PTGIS)重组蛋白 Recombinant Prostaglandin I Synthase (PTGIS)
MacConkeyAgar  GMFG重组人 GMFG / Glia maturation factor, gamma 蛋白 (His 标签) Protein
YGCAgar  FZD5 Protein Human 重组人 Frizzled-5 / FZD5 蛋白 (His 标签)
Hottinger'sAgar  HA Protein H10N9 重组甲型流感 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)
重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

​​​​​​​