Recombinant Human HARS

● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2185	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-509
分子量	55.9 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：cytoplasmic, EC 6.1.1.21, FLJ20491, HARS, HisRS, Histidine tRNA ligase, cytoplasmic, histidine translase, Histidine tRNA ligase, Histidine--tRNA ligase, Histidyl tRNA synthetase, Histidyl-tRNA synthetase, HRS, Human histidyl tRNA synthetase homolog (HO3) mRNA complete cds, SYHC_HUMAN, USH3B  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
SkimMilkSucroseCaseinDigestAgarMedium  TNFRSF1A重组小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 标签) Protein
M –肉汤 M-Broth 250 用于干燥食品和种子中沙门氏菌增菌培养(MERCK方法)  Bcl-2(抗原 0.5mgBcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)
去氧胆酸盐琼脂(DC)250g/瓶用于大肠菌群平板计数incubationmedia去氧胆酸盐琼脂(DC)250g/瓶用于大肠菌群平板计数  CCL22重组人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 标签) Protein
SOC培养基 250 用于基因工程菌大肠杆菌培养  GPNMB Protein Human 重组人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (His 标签)
李氏增菌肉汤基础(LB)26040250g用于李斯特氏菌的选择性增菌培养(GB4789.30-2010)。  FLT1 Protein Rat 重组大鼠 VEGFR1 / FLT-1 蛋白 (His 标签)
Slanetz and Bartley 培养基 (肠球菌琼脂) (CM0377) Oxoid incubation media Slanetz and Bartley 培养基 (肠球菌琼脂) (CM0377) Oxoid  GGT1重组大鼠 GGT1 蛋白 (His 标签) Protein
屎肠球菌(屎链球菌) 模式菌株 支/瓶  Fibulin 1 衰老关键蛋白抗原 0.5mgFibulin 1 衰老关键蛋白抗原
LBBroth  HSF1重组人 HSF1 / HSTF1 蛋白 (His 标签) Protein
琼脂培养基N 250g 于绿脓假单胞菌的分离培养。  GPR114 Protein Human 重组人 GPR114 蛋白 (Fc 标签)
mCPCMediumSupplement  EPHA4 Protein Mouse 重组小鼠 EphA4 / HEK8 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签)
SLBBroth  ART4重组大鼠 ART4 蛋白 (His 标签) Protein
CATC琼脂 CATC Agar 250 用于食品和饮料肠球菌的分离培养(MERCK方法)  ECP(eosinophil cationic protein 0.5mgECP(eosinophil cationic protein)mouse rat 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白抗原
VRB-MUG琼脂VRB-MUG瓶用于大肠杆菌平板计数incubationmediaVRB-MUG琼脂VRB-MUG瓶用于大肠杆菌平板计数  ARG1重组人 ARG1 / Arginase 1 蛋白 (His 标签) Protein
Eosin-MethyleneBlueAgar  GPR37 Protein Human 重组人 GPR37 蛋白 (His 标签)
0酸盐缓冲液(pH7.2)250g用于样品的稀释  LIFR Protein Mouse 重组小鼠 LIFR / CD118 蛋白 (His 标签)
SLBBroth  F7重组小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 (His 标签) Protein
新生霉素 Novobiocin Sodium Salt 1.5mg/支*5 使用前，每支加入100mlHB4153中  CCR-4(C-C chemokine receptor 4 0.5mgCCR-4(C-C chemokine receptor 4) 细胞表面趋化因子受体4抗原
Recombinant Human HARSMS大量元素瓶用于制备MS培养基incubationmediaMS大量元素瓶用于制备MS培养基  DUSP14重组人 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 标签) Protein
无菌均质袋  GPR56 Protein Human 重组人 GPR56 / TM7LN4 蛋白 (His 标签)
缓冲-甘油氯溶液2500g用于样品的保存。(GB4789.10)  CCL3 Protein Rat 重组大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白