Recombinant Human GINS2

● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2092	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-185
分子量	20.2 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：DNA replication complex GINS protein PSF2, GINS complex subunit 2, GINS complex subunit 2 (Psf2 homolog), gins2, HSPC037, Pfs2, PSF2, PSF2_HUMAN  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
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志贺氏菌增菌肉汤配套试剂 10支 每支添加于225mL的志贺氏菌增菌肉汤(023141)中。  Trk B 神经生长因子受体的一种(抗原 0.5mgTrk B 神经生长因子受体的一种(抗原)
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发光菌培养基 250g 用于发光菌的分离培养。  EPHB6重组小鼠 EphB6 蛋白 (His 标签) Protein
MKTTn 肉汤 MKTTn Broth 250 用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)  激肽释放酶9(KLK9)重组蛋白 Recombinant Kallikrein 9 (KLK9)
LT脂基础250g/瓶用于化妆品中细菌总数的测定(ISO)，每升培养基中需添加204(吐温80)incubationmediaLT脂基础250g/瓶用于化妆品中细菌总数的测定(ISO)，每升培养基中需添加204(吐温80)  EEF1E1重组人 EEF1E1 / AIMP3 / p18 蛋白 (His 标签) Protein
LBBroth(Lennox)  LEPR Protein Human 重组人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 蛋白 (His 标签)
RV沙门菌增菌培养基(中国药典)250g用于沙门氏菌选择性增菌培养  IL33 Protein Canine 重组狗 IL33 / Interleukin-33 / NF-HEV 蛋白
泛酸测定培养基 100(g) incubation media 泛酸测定培养基 100(g)  VSIG4重组小鼠 VSIG4 蛋白 (His 标签) Protein
丙二酸盐培养基 Malonate Broth 10克 用于测定肠道细菌对丙二酸盐的利用试验  CCR-3(CC chemokine receptor 3 0.5mgCCR-3(CC chemokine receptor 3) CC趋化因子受体3抗原
玉米粉琼脂250用于真菌培养incubationmedia玉米粉琼脂250用于真菌培养  COLGALT2重组人 GLT25D2 蛋白 (His 标签) Protein
粘液酸盐测试肉汤 1ml*20支  LGALS3 Protein Human 重组人 Galectin-3 / LGALS3 蛋白
PlateCountAgar  CSF2 Protein Rat 重组大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 标签)
培养基(改良高氏1号) 250g 用于的分离培养  IL6R重组小鼠 IL6RA / CD126 蛋白 (His 标签) Protein
D-环丝氨酸 0.1g/支*2 加入250ml TSC琼脂基础中  CD24 CD24抗原 0.5mgCD24 CD24抗原
改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)基础250g/瓶用于O选择性增菌，每225ml培养基中添加incubationmedia改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)基础250g/瓶用于O选择Recombinant Human GINS2性增菌，每225ml培养基中添加1601  MAG重组人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (His 标签)
RoseBengalMedium  LGALS3 Protein Human 重组人 Galectin-3 / LGALS3 蛋白, Low Endotoxin
40%UreaWater  IL10 Protein Rat 重组大鼠 IL10 / Interleukin-10 蛋白

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