MCF 10A (人正常乳腺上皮细胞) (STR鉴定正确)

14―3―3σ

MCF―10A、HBLl00、MCF―7和MDA―MB―231中，14―3―3σ基因CpG岛是非甲基化的，而在Hs578t和MDA―MB―435中却是完全甲基化的。体外实验表明，用5―氮杂―2―脱氧胞苷处理14―3―3。基因失活的细胞可恢复其表达，这更进一步说明14―3―3σ基因表达沉默与其CpG岛甲基化密切相关。此外，6个正常乳腺上皮活检标本都未发生甲基化，而32例乳腺癌的活检标本14―3―3σ基因都发生甲基化。这些研究结果表明，乳腺癌中14―3―3σ基因的表达缺失与甲基化密切相关。  

Nature 深度剖析：管坤良与 Alj 组研究成果为何截然相反，Hippo 通路调控乳腺癌的两面性

1/2，可能会造成不同实验结果。作者猜测，敲除 LATS1/2 带来的 YAP/TAZ 异常持续活化可能对细胞状态有较大的改变，从而使细胞启动某些不为人知的代偿通路以维持稳态，从而改变了 Hippo 通路对 ERα 的调控模式。此外，在 LATS1/2 过表达实验中，Alj 组使用的是瞬间转染，而管组使用的是稳定转染，作者认为这或许会带来一定差异。 2. 其次，双方使用的细胞培养条件有部分不同。Bentires-Alj 组使用的是 M5 培养基培养 PHBECs 和 MCF10A 细胞，鉴于这一培

小鼠乳腺上皮细胞培养

，很难正确计数，必要时用0.1ml细胞悬液加0.9ml结晶紫，剧烈振摇细胞约1min，此时细胞易破坏而使胞核着色，可计数蓝染细胞核数。每克组织约可收货5×10 6 —10×10 6 个细胞。 6. 得到的细胞用含10%FBS的DMEM或无血清培养液悬浮，将上述消化的乳腺上皮细胞以密度为1.0×10 5 —2.5×10 5 个/cm 2 将其接种在厚胶原胶膜包被的培养板上，加入细胞分化培养基进行培养。 7. 培养72h，待细胞