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文献和实验为MudPit的系统分离了来自酵母的80S核糖体的胰蛋白酶降解产物。将这些酸化的肽混合物先装进一个强阳离子交换柱(strong cationexchanger,SCX)中,将不连续的洗脱组分载人RP柱,而后将RP的洗脱产物直接载人质谱仪。在SCX柱床逐渐增加盐浓度梯度,而RP珠(采用典型的Cl。)逐渐增大有机溶剂浓度,这个迭代的过程反复处理12次。在全部酵母溶解产物中,MudPit策略能够让人们识别出大约1500个蛋白质(Washburn,Wolters和Yates,2001)。类似的处理过程也曾用于分离
盐水;十二烷基硫酸钠(SDS);三羟甲基氨基甲烷(Tris);乙二胺四乙酸(EDTA);饱和酚;氯仿;异戊醇;无水乙醇;75%乙醇;蛋白酶K;RNase酶;手术剪刀、镊子、吸水纸;微量取液器;研钵、1.5mL 离心管、一次性手套、1.5mL离心管架、记号笔…… 试剂配制 1.Tris-HCL 1mol/L PH8.0 50ml 配制方法:40ml双蒸水,6.057g固体Tris放入烧杯中溶解,用浓盐酸调PH值到8.0,转移到50ml容量瓶中,加入双蒸水定容,摇匀后,转到准备好的输液瓶中,贴上
1.目的 学会CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞。 2.原理 细菌在0℃ CaCl2低渗溶液中胀成球形,丢失部分膜蛋白,成为容易吸收外源DNA的状态。 3.器材 旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,50ml 微量离心管,1.5ml 微量离心管,双面微量离心管架,台式冷冻离心机,制冰机,恒温摇床,分光光度计,超净工作台,恒温培养箱,摇菌试管,三角烧瓶,接种环。 4.试剂 E. coli XL1-Blue,LB培养基,0.1 mol/L CaCl2溶液,无菌ddH2O 5.实验
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