Anti-GFP Nanob Ag ody arose Be

 Anti-GFP Nanobody Agarose Beads 是一种绿色荧光蛋白结合蛋白偶联的琼脂糖，能够高效特异地结合绿色荧光蛋白 GFP，其结合效率可高达4ug/10ul，相比于直接运用GFP抗体和proteinA/G偶联的Beads，其效率要高很多。
      该Beads可运用于两个蛋白或者多个蛋白的互作分析（Co-IP），蛋白和DNA互作（DNA pull down 或者 CHIP），蛋白和 RNA 互作（RIP）还可以用作质谱分析以及酶活分析。
      Anti-GFP Nanobody Agarose Beads产品不仅能够高效识别结合各种 GFP,比如Egfp、ACGFP，wtGFP, GFP S65T，TagGFP 等，还能识别 CFP、YFP、BFP 等荧光蛋白。产品结合效率非常高，比常规结合方式——抗体+beads 的方式高出很多（如图一）。

【GFP Beads 适应样品范围广】
       适用于组织，器官，细胞，植物材料，细菌，酵母，总之，有 GFP 蛋白的样品该 beads 都能够直接识别结合。

 【应用】
       IP、 CoIP、ChIP、RIP

【注意事项】

1. 因纯beads不好分装，有分装需求的客户，需要和溶液1比1混匀了后分装。

2.如管壁有粘连的beads，可将管子稍静止后吸上层缓冲液冲洗至离心管底部，切勿高速离心。

【使用该产品做 Co-IP方法】
    1. 轻轻上下颠倒 GFP-Beads，使得beads充分混匀，取200ul枪头将前端剪掉1-2mm使枪头口径稍大，用剪过的枪头吸出所需体积量的beads至1.5ml的离心管中，一个样品大约30ul beads。
    2. 加入 1ml washing buffer，轻轻上下颠倒清洗 beads，然后 800g，4℃离心 5min，吸掉上 清液。如此重复三遍。
    3. 将转染后的细胞弃掉上清，用 PBS 清洗一遍，然后胰酶重悬（为重悬充分，加入胰酶后 37℃ 孵育 5min）。枪头轻轻重悬细胞转移至 1.5ml 离心管，800g 离心 5min，弃上清。
    4. 利用以下 lysis buffer 裂解（10 mM Tris/Cl pH 7.5; 150 mM NaCl; 0.5 mM EDTA; 0.5% NP-40；1xcocktail）。枪头充分吹吸至细胞完全裂解，冰浴 10min。
    5. 高速离心后，将上清液吸出，加入30微升 GFP-BEADS 孵育，4℃垂直混匀 2-3h（也可 4℃ 过夜）。推荐30ul beads 结合至少两个6cm皿细胞表达量的蛋白，在蛋白表达量低的情况 下可多收集样本量保证样品饱和 beads。
    6. 800g，4℃离心5min，吸掉上清液，（可取一定量上清液作为对照），加入1ml预冷的washing buffer，上下颠倒清洗 beads，然后 800g，4℃离心5min。重复3-5遍。
    7. 充分除去上清，加入30-50微升 4x sample buffer，混匀后100℃煮10min。如需蛋白不变性或非变性则需50-100微升200毫摩尔PH2.5 的甘氨酸溶液洗脱目的蛋白，可在 4℃条件下垂直混匀 10min，800g 离心，将上清转移至新离心管，加入5-10微升中和buffer 1 M Tris pH 10.4 (四度下的 PH）。  Western 或者 IP MS 的样品属于变性蛋白，不需按此处理，煮样后进行下一步操作。)   
    8. 13000rpm离心10min，上清液可用western blot鉴定。如果是质谱检测，wb后切胶酶解，纯化后上机检测。

【推荐 washing buffer】
     10 mM Tris/Cl pH 7.5; 150 mM NaCl; 0.5 mM EDTA。

【质量保证】

  Anti-GFP Nanobody Agarose Beads 的每批产品实行严格质量检验，并进行多次反复实验验证，以确保产品质量。请用户使用前务必认真阅读本手册。 

【使用限制】
        本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合 格产品。
        在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，仅限于此产品的价值本身。