Recombinant Human D Amino Acid

商品属性：

货号	XG-DB1731	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-347
分子量	38.1 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：D-amino-acid oxidase, DAAO, DAMOX, DAO, DAO1, EC 1.4.3.3, MGC35381, OXDA, OXDA_HUMAN  纯度 Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
Humanniicoxide,NOELISAKit 人血清(NO)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 麦康凯琼脂培养基 250g 供分离发酵乳糖的革兰氏阴性肠道杆菌
HumanHydroxyproline-RichGlycoprotein,HRGPELISA试剂盒人羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒规格：96T/48T 麦迪、麦白霉素检定培养基(普通轻质斜面培养基)麦迪(白)霉素效价测定
组织肌酸激酶同工酶混合型(CK-MB)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次 FS培养基 250g 用于梭杆菌的选择性增菌培养
Humanlipolysaccharidebindingprotein,LBPELISAKit人脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒规格：96T/48T 李斯特氏菌检验检验培养基
人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(aFABP)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 YGC琼脂 YGC Agar 用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分离培养(ISO方法)
Human adiponectin (ADP) ELISA Kit 人脂联素(ADP)ELISA试剂盒 气单胞菌鉴别琼脂/Aeromonas Differential Agar Aeromonas Differential Agar 250克 分离培养和鉴别气单胞菌
HumanCalfiestinalalkalinephosphatase,CIAPELISAKit 人牛小肠碱性0酸酶(CIAP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 PPLO肉汤基础250g/瓶无酚红，用于支原体的培养，每70ml培养基中添加无菌新鲜酵母浸液和20ml马血清incubationmediaPPLO肉汤基础250g/瓶无酚红，用于支原体的培养，每70ml培养基中添加无菌新鲜酵母浸液和20ml马血清
HumanHydroxy-Pyridiniumcrosslinks,OH-PYDELISA试剂盒人羟基胶原交联(OH-PYD)ELISA试剂盒规格：96T/48T 葡萄糖肉汤 250g 用于营养苛求菌培养和肠道菌产气实验
组织肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性比色法定量检测试剂盒25次 脑—心浸萃液态培养基28360广泛用于霉菌、酵母、细菌的培养，包括营养要求较高的微生物的培养，特别用于饮用天然矿泉水和城...
Humanlipocalin2,LCN2ELISAKit人脂质运载蛋白2(LCN2)ELISA试剂盒规格：96T/48T YM Agar 培养基 250g incubation media YM Agar 培养基 250g
人脂肪酸结合蛋白(FABP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 运动发酵单孢菌 糖化淀粉。 支/瓶
Human lipoteichoic acid (LTA) ELISA Kit 人脂0壁酸(LTA)ELISA试剂盒 阪崎肠杆菌成套生化鉴定管套/盒*5盒用于阪崎杆菌的生化试验
Recombinant Human D Amino Acid OxidaseHumanierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit 人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 L-Cysteinehydrochloride
humanhypotheticalproteinLOC433328ELISA试剂盒人假定蛋白LOC433328ELISA试剂盒规格：96T/48T KF链球菌琼脂培养基28350用于粪性链球菌滤膜法选择性培养和计数(GB/T8538-2008，SN/T2206.5-2009和CJ/T001)。
组织肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次 YM Agar-capsu le 培养基 5capsules incubation media YM Agar-capsu le 培养基 5capsules