Recombinant Human beta Actin

商品属性：

货号	XG-DB1339	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	102-375
分子量	30 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：A26C1A, A26C1B, ACTB, ACTB_HUMAN, Actin beta, Actin cytoplasmic 1, Actin, cytoplasmic 1, N-terminally processed, Actx, b actin, b-actin, Beta cytoskeletal actin, Beta-actin, BRWS1, E430023M04Rik, Melanoma X actin, MGC128179, PS1TP5 binding protein 1, PS1TP5BP1  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
胰蛋白胨大豆琼脂  5kg/袋  一种通用培养基，用于各种微生物的培养    MAP2K6 Protein Human  MKK6 / MEK6 / MAP2K6 蛋白 (His & GST 标签)
肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基    CLEC4D Protein Rat  CLEC4D / CLECSF8 蛋白 (Fc 标签)
匹克氏肉汤基础A  100g  用于溶血性链球菌的增菌培养    IL4 IL4 / Interleukin-4 蛋白 (Q136D, Y139D, His 标签) Protein
Pick’sBrothBaseA    含动力蛋白重链域蛋白1(DNHD1)重组蛋白 Recombinant Dynein Heavy Chain Domain Containing Protein 1 (DNHD1)
MeatInfusionBroth    NUDT5 NUDT5 / ADP-sugar Pyrophosphatase 蛋白 (His 标签) Protein
葡萄糖肉汤  250g  用于链球菌的增菌培养    MAP3K8 Protein Human  TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 蛋白 (GST 标签)
AzideDextroseBroth    IL2RB Protein Canine 重组狗 IL2RB / IL2 Receptor beta 蛋白 (Fc 标签)
肠球菌琼脂  250g  用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养    SDC4 Syndecan-4 / SDC4 蛋白 (Fc 标签) Protein
滤膜肠球菌琼脂  250g  用于水或其他样品中肠球菌的滤膜法分离或计数    过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)重组蛋白 Recombinant Peroxisome Proliferator Activated Receptor Alpha (PPARa)
Recombinant Human beta ActinFilterMembraneEnterococcusAgar    RAB27B RAB27B 蛋白 (His 标签) Protein
CATC琼脂  250g  用于食品和饮料肠球菌的分离培养    MAP4K2 Protein Human  MAP4K2 / GC Kinase 蛋白 (His & GST 标签)