Recombinant Human UBE2D4

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB3732	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-147
分子量	16.1 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：HBUCE 1, HBUCE1, UB2D4_HUMAN, UBCH5D, UBE2D 4, UBE2D4, Ubiquitin carrier protein D4, Ubiquitin conjugating enzyme 1 isoform, Ubiquitin conjugating enzyme E2D 4, Ubiquitin conjugating enzyme HBUCE1, Ubiquitin-conjugating enzyme E2 D4, Ubiquitin-protein ligase D4  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
公司正在出售的产品：
大鼠碱性0酸酶elisa试剂盒   大鼠碱性0酸酶试剂盒   规格型号：96T/48T   大鼠碱性0酸酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠碱性0酸酶试剂盒、大鼠碱性0酸酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。    YWHAE重组小鼠 14-3-3 epsilon / YWHAE 蛋白 (GST 标签) Protein
大鼠肺表面活性物质相关蛋白celisa试剂盒   大鼠肺表面活性物质相关蛋白c试剂盒   规格型号：96T/48T   大鼠肺表面活性物质相关蛋白c试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠肺表面活性物质相关蛋白c试剂盒、大鼠肺表面活性物质相关蛋白ceisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。    IL3 Protein Human 重组人 IL-3 / Interleukin-3 蛋白 (His 标签)
大鼠抗酸性0酸酶   英文名称：   Tarate Resista Acid Phosphatase 5      英文缩写：   ACP5    NRG1重组人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD) Protein
Recombinant Human UBE2D4大鼠端粒酶   英文名称：   Rat Telomerase      英文缩写：   TE    CA9 Protein Canine 重组狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 (His 标签)
大鼠胸腺活化调节趋化因子   英文名称：   Rat Thymus Activation Regulated Chemokine      英文缩写：   TARC    激肽释放酶10(KLK10)重组蛋白 Recombinant Kallikrein 10 (KLK10)
大鼠甲状腺球蛋白抗体   英文名称：   Rat Thyroglobulin Aibody      英文缩写：   TGAb    CTSH重组小鼠 Cathepsin H / CTSH 蛋白 (His 标签) Protein
大鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T    CA13 Protein Human 重组人 Carbonic Anhydrase XIII / CA13 蛋白 (His 标签)
大鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)ELISAKit   ELISA.   96T/48T    TMUB2重组人 TMUB2 蛋白 (His 标签) Protein
大鼠纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T    ACVR1 Protein Mouse 重组小鼠 ALK-2 / ACVR1 蛋白 (His & Fc 标签)
大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISAKit   ELISA.   96T/48T    CK5(Cytokeratin 5 0.5mgCK5(Cytokeratin 5) 细胞角蛋白5抗原
大鼠抗平滑肌抗体   英文名称：   Rat Aismooth Muscle Aibody      英文缩写：   ASMA    FCGR2重组小鼠 CD32 / FCGR2B 蛋白 (His 标签) Protein
大鼠抗抗体   英文名称：   Rat Aispermiogenesis aibody      英文缩写：   ASAb    SNCA Protein Human 重组人 SNCA / alpha-Synuclein 蛋白
​​​​​​​重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。  ​​​​​​