小动物活体成像萤光素酶|D-荧光素钾盐发光底物122799

一、生成模型中荧光素酶活性的动力学曲线 

1.通过腹膜内（i.p.）途径用15mg / ml或30mg / ml的溶液将荧光素注射入动物体内， 溶于PBS，工作剂量为150 mg / kg。*

2.等待三分钟，用你选择的方法镇静动物;气体或注射麻醉。 （2％ 异氟醚气体麻醉可使健康动物在IVIS中安全镇静45分钟。）

3.将镇静的动物放入成像室并拍摄第一张图像，现在大约为5张 在Luciferin注射后几分钟。

4.每隔5-10分钟继续拍摄图像，最多约40分钟。这将表明动力学 模型中荧光素摄取的曲线。

5.一旦建立了曲线，就可以按照右侧的成像程序进行操作 此后成像的最佳时间点。 （Luciferin注射后10-20分钟对大多数人来说是理想的 楷模。）

6.每隔10分钟，最多40分钟，使用IVIS成像系统检查体外生物发光 确定动力学曲线并找出每种细胞类型的峰值成像时间点。

二、使用PerkinElmerIVIS®体内成像系统 

1.将荧光素注入动物体内。用15mg / ml或30mg / ml的溶液溶解在PBS中，进行加工剂量为150毫克/千克。*

2.根据动力学曲线确定允许在动物中分配最佳时间。

3.将鼠放入透明的有机玻璃麻醉盒（2.5-3.5％异氟醚）中，使视觉畅通无阻监测动物;例如人们可以很容易地确定动物是否在呼吸。 向盒子提供麻醉的管子被分开，以便麻醉的浓度相同输送到位于成像室内的麻醉歧管。

4.一旦麻醉完全发挥作用，将鼠从盒子转移到附着的鼻锥上成像室内的歧管。关上门然后点击Living中的“获取”按钮计算机屏幕上的图像程序。成像时间为每个位置1至5分钟（背/腹），取决于实验，每个位置的5分钟数是最大值。当将鼠从背部转向腹部（反之亦然）时，可以检查它是否有任何窘迫的迹象或生命力的变化。成像过程完成后，将鼠放回笼中，快速唤醒。

*注意：许多人喜欢注入清醒的动物。注射前镇静鼠是可以接受的，但是这样做可能会略微延长动力学（峰值荧光素酶表达时间）。

一、实验材料准备和执行步骤

实验材料准备

•D-Luciferin萤光素钾盐，1.0克/瓶（PerkinElmer订货＃122799）

•无菌水

•完整的媒介

应将细胞接种于平板中过夜或测定前数小时，以使细胞附着于细胞 底部。可以将悬浮细胞系接种在平板中的工作溶液中以进行直接培养成像。

如果倍增时间相对较短，则应考虑倍增时间进行细胞计数。

执行步骤

1.在无菌水中制备200X荧光素储备液（30 mg / ml）。注意：人们可以重建 将全部1.0克D-荧光素在33.3毫升无菌水中制成30毫克/毫升（200倍）的原液，或重建个体实验所需的D-荧光素的量。

2.通过倒置轻轻混合，直至荧光素完全溶解。*

3.在预热的组织培养基中制备150μg/ ml的D-荧光素工作溶液。 快速解冻200X荧光素的储备溶液，并在完全培养基中稀释1：200（最终150μg/ ml）浓度）。

4.从培养的细胞中吸出培养基。

5.在成像前将1x荧光素溶液加入细胞中。注意：将细胞在37°C下短时间孵育在成像之前可以增加信号。孵育时间取决于特定的细胞类型。一般来说孵育10分钟就足够了;根据需要进行测试和调整。

6.每隔10分钟，最多40分钟，使用IVIS成像系统检查体外生物发光确定动力学曲线并找出每种细胞类型的峰值成像时间点。

一、实验材料准备和执行步骤

实验材料准备

•D-Luciferin，萤火虫，钾盐，1.0克/瓶（PerkinElmer订货＃122799）

•DPBS，不含Mg2 +和Ca2 +

•注射器过滤器，0.2μm

执行步骤

1.在DPBS中制备15mg / ml新鲜的Luciferin原液。*

2.通过0.2μm过滤器过滤灭菌。

3.确定10μL/ g体重的注射量。每只小鼠应接受150毫克荧光素/千克 体重。 （例如，对于10g小鼠，注射100μL以递送1.5mg荧光素）

4.在体内成像前10-15分钟腹膜内（i.p.）注射荧光素，或由 动力学曲线。**

*强烈建议在稀释后立即使用工作溶液。必要时溶解萤光素 可在4°C下储存长达3周;但是，在4°C或-20°C下长时间存放可能会导致信号退化。

**应对每个新动物模型进行荧光素动力学曲线以确定峰值信号时间。

请参阅我们的'确定您的模型的荧光素动力学曲线'说明书 在我们的网站上下载。

注意：荧光素是一种光敏试剂，应尽可能避免直射光。我们 建议保护荧光素免受光照（例如用光阻材料如锡覆盖）

在整个测定过程中，从原液制备到程序完成。