IMAC富集磷酸化肽段的步骤

磷酸化修饰是一种可逆的蛋白修饰，调控蛋白活性，传递信号，是细胞健康和疾病的核心调控机制；真核生物中预计有三分之一的蛋白具有磷酸化修饰。

 

然而，磷酸化修饰的丰度很低，直接进行质谱（MS）检测，非磷酸化的肽段会造成很高的背景，因此磷酸化肽段需要进行富集后检测。此外，对样品磷酸化肽段预先分离纯化并进行富集也可降低样品复杂程度，从而改善磷酸肽的MS信号并提高MS检测深度。

 

固相金属亲和

最广泛使用的磷酸肽富集方法。其原理是根据蛋白质磷氨基酸上带负电荷的磷酸化基团与带正电荷的金属离子（如Fe3+）高度亲和的特性，在特定的溶液缓冲体系中金属离子能特异性结合磷酸化多肽从而达到富集的目的。

 

IMAC富集磷酸化肽段的步骤：以Fe3+-IMAC为例，首先，Fe3+-IMAC将Fe3+螯合到色谱固定相上，样品中磷酸肽段与Fe3+特异异性结合从而被选择性吸在固定相上。然后用磷酸盐或高pH溶液洗脱下富集的磷酸化肽段。IMAC富集方法可选择性的富集磷酸化肽段，对含有多个酸性残基的磷酸化多肽也同样具有非特异性结合吸附能力，这降低了该方法特异性富集磷酸化肽段的效率。因此，可通过优化洗脱溶液和新材料的开发（如Ti4+-IMAC、Fe3+-IDA-IMAC和Ga3+-Fe3+-IMAC）来拓宽IMAC法特异性富集方法的应用范畴。

 

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，推出磷酸化定量蛋白组分析服务技术包裹。只需要将您的实验目的告诉我们并寄送样品，百泰派克生物科技负责项目后续，包括蛋白提取、蛋白酶切、磷酸化肽段富集、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析所有事宜。

 

其他服务项目

 

优质检测平台

（1）基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台

该平台配备了Agilent 2100 生物分析仪、ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化分子量测量、杂质表征表达研究等:

（2）基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台

该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri,Thermo Scientific Exploris以及氢气交换质谱仪配合机械臂为蛋白贡组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究;

（3）生物药物表征平台

该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢气交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究:

（4）基于10x Genomics的单细胞分析平台

该平台能够完成基于10x Genomics单细胞分析平台的检测流程包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序;

（5）基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台

采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪(Mass Cytometry Systemfor Single Cell Analysis)用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析;

（6）基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台

基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究;

（7）生信云平台

基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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