Recombinant Human P21

商品属性：

货号	XG-DB2873	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	2-164
分子量	38.6 kDa	标签	N-terminal His-IF2DI Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：CAP20, CDK-interacting protein 1, CDKI, CDKN1, Cdkn1a, CDN1A_HUMAN, CIP1, Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 1A, Cyclin-dependent kinase inhibitor 1, Cyclin-dependent kinase inhibitor 1A (P21), Cyclin-dependent kinase inhibitor 1A (p21, Cip1), DNA Synthesis Inhibitor, MDA-6, MDA6, Melanoma differentiation-associated protein, Melanoma differentiation-associated protein 6, p21, P21 protein, p21CIP1  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
8- 羟基脱氧鸟苷酸 (8-OHdG)   作用：   ELISA      ESAM Protein Human 重组人 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白 (His 标签)
食欲素 A(Orexin A)   作用：   ELISA      NAPA重组人 NAPA / alpha-SNAP 蛋白 (His 标签) Protein
P53 蛋白   作用：   ELISA      FGFR2 Protein Human 重组人 FGFR2 蛋白 (His & Fc 标签)
血小板活化因子 (PAF)   作用：   ELISA      TGF- Beta1 (Ttansforming Growth Factor – Beta1 0.5mgTGF- Beta1 (Ttansforming Growth Factor – Beta1) 转移生长因子–β1(抗原)
6-0酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）试剂盒   紫外分光光度法   50管/48样    GP140重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group P, strain RBF168) (Fc 标签) Protein
胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）试剂盒   紫外分光光度法   50管/48样    LALBA Protein Human 重组人 LALBA / Alpha-lactalbumin 蛋白 (Fc 标签)
苹果酸酶（ME）试剂盒   紫外分光光度法   50管/48样    XIAP重组人 XIAP / BIRC4 蛋白 (AVI 标签) Protein
6-0酸葡糖糖酸脱氢酶（6PGDH）试剂盒   紫外分光光度法   50管/48样    HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)
6XDNALoadingBuffer   1ml*10    松弛肽(RLN)重组蛋白 Recombinant Relaxin (RLN)
D15000DNAMarker   250ul    IL1A重组人 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 蛋白 Protein
D2000DNALadder   250ul    ACBD6 Protein Human 重组人 ACBD6 蛋白 (His 标签)
DL2000DNALadder   500ul    NCAM2重组人 NCAM2 / Neural cell adhesion molecule 2 蛋白 (His 标签) Protein
6-BenzylAminopurine   25g    TNFRSF11A Protein Rat 重组大鼠 TNFRSF11A 蛋白 (Fc 标签)
6-羧基二乙酸荧光素   10g    AGEs control article(advanced glycosylation end products control article 50mgAGEs control article(advanced glycosylation Recombinant Human P21end products control article) 晚期糖基化终末产物蛋白对照品
6-CarboxyfluoresceinDiacetate   25g    IL17RA重组小鼠 IL17RA / IL17R / CD217 蛋白 (His 标签) Protein