Recombinant Human MMP14

商品属性：

货号	XG-DB2650	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	316-511
分子量	45 KDa	标签	N-terminal His-IF2DI Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：Matrix metallopeptidase 14 (membrane inserted), Matrix metalloproteinase 14, Matrix metalloproteinase-14, Membrane type 1 matrix metalloproteinase, Membrane type 1 metalloprotease, Membrane type matrix metalloproteinase 1, Membrane-type matrix metalloproteinase 1, Membrane-type-1 matrix metalloproteinase, MMP 14, MMP X1, MMP-14, MMP-X1, Mmp14, MMP14_HUMAN, MMPX1, MT MMP 1, MT-MMP 1, MT1 MMP, MT1-MMP  纯度 Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
改良纤维二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)琼脂基础 250g 用于创伤弧菌的选择性分离培养(GB/T4789.-2008)。    EPHB2 EphB2 / Hek5 蛋白 (aa 570-987, His & GST 标签) Protein
Balb/c小鼠脂肪间质干细胞成软骨诱导分化培养基Balb/cmouseadiposemesenchymalstemcellstothedifferentiationmediumtoinducecartilage    S100A10 Protein Human  S100A10 蛋白 (His 标签)
溴紫蛋白胨培养液 250g 用于压力蒸气消毒过程监测指示菌(嗜热脂肪杆菌芽孢)的培养及消毒效果测定    B2M Protein Rat  B2M / Beta-2-microglobulin 蛋白 (His 标签)
NaHCO3AgarBase    CDCP1 CDCP1 蛋白 (Fc 标签) Protein
DHL agar acc.to SAKAZAKI 乳糖琼脂 1.11435.0500 MERCK默克 incubation media DHL agar acc.to SAKAZAKI 乳糖琼脂 1.11435.0500 MERCK默克    淀粉样前体蛋白(APP)重组蛋白 Recombinant Amyloid Precursor Protein (APP)
脱脂奶蔗糖胰蛋白胨琼脂 250g 用于致病性嗜水气单胞菌的脱脂奶平板试验(GB/T 18652-2002)。    COMMD8 COMMD8 蛋白 (His 标签) Protein
Balb/c小鼠脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基Balb/cmouseadiposemesenchymalstemcellsintotheculturemediuminduceddifferentiationoffat    S100A10 Protein Human  S100A10 蛋白 (His 标签)
OXAAdditive    IL1R2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL1R2 / IL1RB 蛋白 (Fc 标签)
可溶性焦0酸铁0.025/支*5每支添加于HB8493或HB8493-1中    KLK13 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白 Protein
MSRV medium( base) modified MSRV改性培养基(基础) 1.09878.0500 MERCK默克 incubation media MSRV medium( base) modified MSRV改性培养基(基础) 1.09878.0500 MERCK默克    肽酶D(PEPD)重组蛋白 Recombinant Peptidase D (PEPD)
Recombinant Human MMP14MC培养基 250g 用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数    AKT2 AKT2 / protein kinase B β / PKB beta 蛋白 (His & GST 标签) Protein
Balb/c小鼠脂肪间质干细胞完全培养基Balb/cmouseadiposemesenchymalstemcellsculturemedium    S100A11 Protein Human  S100A11 / S100C 蛋白