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- 2025年07月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
at-20℃
- 保质期：
详见说明
- 英文名：
pLV3-U6-MCS-sgRNA-Cas9-EGFP(去WPRE+CMV)
- 库存：
现货
- 供应商：
上海圻明生物
- 规格：
0.5-2ug
上海圻明生物优势供应植物系列、大肠杆菌系列、酵母系列、细胞病毒等质粒载体。公司可根据客户需求构建质粒载体。
pLV3-U6-MCS-sgRNA-Cas9-EGFP(去WPRE+CMV)质粒价格基本信息（网页仅供参考，详细图谱序列资料请咨询客服）：caagatgttggcccagaaggctgaggaaaaggagaaccattgtcccacaatgctccggcccctttcacatcgcacagtcacaggggcaaagcccctgaaaaaggctgtggtgatgcccctacagctaattcaggagcaggcagcatccccaaatgccgagatccacatcctgaagaataaaggccggaagagaaagctggagtccctggatgccctagagcctgaggagaaggctgaggactgctgggagctacagatcagcccggagctactggctcatgggcgccaaaaaatactggatctgctgaacgaaggctcagcccgagatctccgcagtcttcagcgcattggcccgaagaaggcccagctaatcgtgggctggcgggagctccacggccccttcagccaggtggaggacctggaacgcgtggagggcataacggggaaacagatggagtccttcctgaaggcaaacatcctgggtctcgccgccggccagcgctgtggcgcctccCTCGAGACCGGTGACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGATTACAAGGATGACGATGACAAGTGACCGGTaAGTTTAAACCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGCTGGGGCTCTAGGGGGTATCCCCACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGGCCATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTAATTCTG
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文献和实验（如某些原代细胞）。 无标记：适合短期池化实验，但无法富集。 2. 启动子 gRNA 一般用 U6 启动子（Pol III）。要注意 U6 对连续 T 敏感（poly-T 会导致转录提前终止），这也是 gRNA 设计时的禁忌之一。 Cas9 常用 EF1α、CMV、CAG 等。CMV 在某些细胞系（尤其是小鼠细胞和一些原代细胞）中容易沉默，长期实验建议选 EF1α 或 CAG。 3. 滴度：物理滴度 ≠ 功能滴度 这是最重要的一个坑。 物理滴度：p24 ELISA 或 qPCR 测基因组拷贝
( nonhomologous end-joining) 修复重新连接 DNA，造成靶点附近 DNA 序列缺失突变。 Cas9 切割原理: 2、pTYNE 载体靶点验证原理：将包括靶点在内的大约 200bp 基因组序列克隆到 pTYNE 载体。构建好的 pTYNE 载体与 pCas9/gRNA1 基因敲除载体共转染 293T 细胞。如果靶点有效，基因敲除载体对 pTYNE 载体载体切割，经过细胞修复后 pTYNE 上移码突变的 EGFP 基因得到修复，发出绿色荧光。 3、阳性细胞筛选原理
该载体在大肠杆菌中的复制。 U6启动子是确保目的shRNA转录，个人觉得转染的shRNA表达载体应该具有真核复制起点吧？！ 网上搜到一种RNAi载体pGO包含的序列：pUC复制起点pUCori、fl复制起点flori、细菌启动子P、卡那霉素基因Kan、HSV-TKPolyA、U6启动子U6promoter 和多克隆位点MCS，其特征在于还含有用于表达绿色荧光蛋白基因的转录元件，包括CMV启动子CMVpromoter、增强绿色荧光蛋白基因EGFP和 SV40PolyA
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