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Gad2-Cre小鼠是一种在谷氨酸脱羧酶2(Glutamate decarboxylase 2, Gad2)基因座插入Cre重组酶的转基因小鼠模型。Gad2编码谷氨酸脱羧酶,这是一种将谷氨酸转化为γ-氨基丁酸(GABA)的酶。GABA是主要的抑制性神经递质,Gad2-Cre小鼠主要用于研究中枢神经系统中GABA能神经元的功能及其在各种神经过程中的作用。
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Gad2的功能:
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GABA合成: Gad2编码的谷氨酸脱羧酶负责将谷氨酸转化为GABA,GABA是中枢神经系统中主要的抑制性神经递质。
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神经递质调控: GABA在调节神经元兴奋性、神经回路活动和信息处理方面起关键作用。
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Cre/loxP系统的应用:
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Cre重组酶: 一种能够特异性识别loxP位点并介导基因重组的酶,用于实现基因的条件性敲除或激活。
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条件性基因敲除/激活: 通过Gad2-Cre小鼠与携带loxP位点的靶基因小鼠杂交,研究人员可以在GABA能神经元中特异性地敲除或激活目标基因,研究其功能。
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研究应用:
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GABA能神经元研究: Gad2-Cre小鼠用于研究中枢神经系统中GABA能神经元的分布、功能及其在神经回路中的作用。
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基因功能研究: 通过条件性敲除或激活特定基因,研究这些基因在GABA能神经元中的功能。
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行为和神经科学研究: 研究GABA能神经元在行为、学习和记忆、情绪调节等方面的作用。
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操作方法:
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基因敲除/激活实验: 将Gad2-Cre小鼠与携带loxP位点的靶基因小鼠杂交,生成条件性敲除或激活的后代。通过分析这些小鼠的表型,研究特定基因在GABA能神经元中的功能。
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荧光显微镜和流式细胞术: 结合报告基因系统,可以通过荧光显微镜和流式细胞术等方法,追踪和分析GABA能神经元的分布和行为。
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表型和观察结果:
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GABA能神经元标记: Gad2-Cre小鼠结合报告基因系统,可以清楚地标记和追踪GABA能神经元,研究它们在不同生理和病理状态下的分布和功能。
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基因功能研究: 通过在GABA能神经元中特异性敲除或激活目标基因,研究这些基因在调节神经元活动、神经回路功能和行为中的作用。
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疾病模型:
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神经精神疾病研究: 研究GABA能神经元在抑郁症、焦虑症、精神分裂症等神经精神疾病中的作用,探索新的治疗策略。
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神经退行性疾病: 研究GABA能神经元在阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性疾病中的作用,揭示相关的病理机制和治疗靶点。
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癫痫研究: 研究GABA能神经元在癫痫发作中的作用,探索潜在的治疗方法。
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通过使用Gad2-Cre小鼠,研究人员能够详细研究GABA能神经元在各种神经过程和疾病中的作用。这些模型在神经科学研究中具有重要意义,为科学家提供了宝贵的工具来探索和测试潜在的治疗方法。
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文献和实验家族。当 KRAS 基因发生异常时,下游信号传导失调导致肿瘤发生,KRAS 突变也是中国 NSCLC 的患者第二大常见的基因突变,其中 KRAS G12C 在肺腺癌中最为常见。 目前 NSCLC 的小鼠模型主要集中在腺癌亚型上,大多数的研究采用条件性 KRAS 点突变模型进行,在 KRAS-LSL-G12C 或 KRAS-LSL-G12D 小鼠细胞中引入 Cre 重组酶导致内源性水平上突变等位基因的表达,模拟人类肿瘤发展的启动条件。Jackson 等[2] 就采用了这样的方式构建肿瘤模型,他们在 KRASG12
。随后,才能进行杂合子小鼠的相互交配。注意点:-不同的 KO Founder 之间不能相互交配。-不同的 KO Founder 的子代之间也不建议相互交配。条件性基因敲除获得 flox 纯合同时 Cre 阳性的小鼠(f/+;Cre-)×(f/+;Cre+)→ f/f;Cre+Flox 小鼠在去除 Neo 基因以后(CRISPR/Cas9 途径获得的 CKO 小鼠省略此步骤),获得仅含有两个 loxP 位点的 flox 杂合子小鼠(flox/+,可缩写成 f/+)。 flox 杂合子(f/+)小鼠与组织
,会采用两种转基因动物进行杂交,即一种带Cre的转基因动物和一种带loxP序列的转基因动物进行交配,使得后代既带Cre又带loxP基因,然后Cre重组酶会识别loxP位点,导致基因重组(图2)。由于Cre基因的表达受上游启动子的调控,这样启动子的时空特异性就决定了基因重组的时空特异性。虽然该方法可以实现高效、特异的基因重组,但是以下不足限制了用转基因动物进行基因操作的发展: 1) 转基因动物的难以获得:目前虽然已经有一些Cre和loxP转基因动物,但是要获得这些转基因小鼠比较困难,特别
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