- ￥600
- BestBio贝博
- BB-31013
- 上海
- 2025年07月11日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 保质期：
一年
- 供应商：
贝博
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50T
贝博® BBproExtra® 总蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代培养动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织样品中提取总蛋白。配合其他试剂时，也可以用于植物、细菌、真菌、酵母等样品的总蛋白提取。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳等下游应用。不可以用于免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。需要IP、酶活分析等应用请使用贝博其他货号的试剂盒（相关产品BB-3101）。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒（相关产品BB-3181）。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验悬浮细胞蛋白提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5×106个细胞，在4℃，2500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106 -1×107个细胞（大约50 mg细胞/50 μl细胞沉淀体积）中加入500 μl冷的总蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
贴壁细胞蛋白提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 小心吸取贴壁细胞的培养液。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干PBS。
4. 加入适量冷的总蛋白提取液，振荡15-30分钟，至细胞充分裂解，用细胞刮刀刮一遍，将裂解液吸入另一干净离心管。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织样本总蛋白提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取50-100 mg组织样本，用PBS洗干净，然后用手术剪刀剪碎，加入500 μl总蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡10-20分钟。
4. 在4℃，10000-14000×g条件下离心15分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
【求助】新手 请问western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗
xungufeng820 各位大侠： 小弟是新手，师兄们也没做过的，不知western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗？急盼回复！万分感谢！ snowxyh 我用过总蛋白提取试剂盒提蛋白，之后western-blot检测NF-KB，但是感觉这样得到的蛋白浓度很稀，需要比较大的上样量才能检测出来，个人感觉，还是用传统的细胞匀浆裂解，离心提取上清，这样得到的蛋白浓度大，做试验结果好
真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
。 2）RNA 提取 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。 具体操作：取 200 μl 外泌体于 1.5 ml EP 管中，加入 800 μl Trizol 试剂，充分混合，裂解 10 min，12000 rpm 离心 10 min 取上清。 3）反转录 采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒：适用于长片段 RNA（如 mRNA、LncRNA
器，细胞膜组分等。 3. 根据实验目的，目标蛋白分子量及蛋白定位，设计合理的对照及上样顺序，并选择合适的内参，确认上样量。 例如：验证目标蛋白在胞质胞核中易位的情况，首先将样品进行胞质和胞核蛋白分离，可设定总蛋白为对照组，胞质与胞核蛋白样品应同时上样到一块胶中保证 WB 所有条件一致，才可说明蛋白表达量的差异和趋势，若在不同胶中，孵育曝光等条件无法统一，得出的结论会导致偏差。 内参选择的方向可以考虑以下四点： 1）确认样本种属来源：是哺乳动物还是植物还是其他 2）分子
