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- BestBio贝博
- BB-31012
- 上海
- 2025年07月15日
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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 保质期：
一年
- 供应商：
贝博
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50T
贝博® BBproExtra® 总蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代培养动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织样品中提取总蛋白。配合其他试剂时，也可以用于植物、细菌、真菌、酵母等样品的总蛋白提取。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Pull-down、IP等蛋白相互作用研究，也可以用于WB、蛋白质电泳、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒（相关产品BB-3181）。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）。 本试剂盒按每个处理样本50 mg细胞/组织计（大约50 μl细胞沉淀体积），如果需要处理大量的细胞/组织，将提取液按细胞体积的1：10加入细胞沉淀即可。每个50T试剂盒大约可以提取2.5 g细胞/组织样本的总蛋白。根据不同的细胞类型，100 mg细胞沉淀物（107个细胞）的总蛋白质产量大约为6mg左右。
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文献和实验细胞样本总蛋白提取：
悬浮细胞蛋白提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5×106个细胞，在4℃，2500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106 -1×107个细胞（大约50 mg细胞/50 μl细胞沉淀体积）中加入500 μl冷的总蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
贴壁细胞蛋白提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 小心吸取贴壁细胞的培养液。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干PBS。
4. 加入适量冷的总蛋白提取液，振荡15-30分钟，至细胞充分裂解，用细胞刮刀刮一遍，将裂解液吸入另一干净离心管。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织样本总蛋白提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取50-100mg组织样本，用PBS洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎，加入500 μl总蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡10-20分钟。
4. 在4℃，10000-14000×g条件下离心15分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【求助】新手 请问western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗
xungufeng820 各位大侠： 小弟是新手，师兄们也没做过的，不知western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗？急盼回复！万分感谢！ snowxyh 我用过总蛋白提取试剂盒提蛋白，之后western-blot检测NF-KB，但是感觉这样得到的蛋白浓度很稀，需要比较大的上样量才能检测出来，个人感觉，还是用传统的细胞匀浆裂解，离心提取上清，这样得到的蛋白浓度大，做试验结果好
蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）对解析生命活动过程与疾病发生发展过程至关重要。随着时代发展，虽然大规模、高通量的生物学研究手段大大促进了蛋白质相互作用的预测，但这种预测还需要进一步利用体外和体内系统进行验证。分析蛋白质互作的方法多种多样，本篇文章为大家介绍以下几种互作分析技术： 免疫共沉淀 Co-IP 免疫沉淀 （IP）、免疫共沉淀 （Co-IP）和 pull-down 都是常用的从复杂的混合样品中获取目标分子，以进行下一步分析的方法，如检测蛋白质能否相互作用。在此类实验中，被研究的蛋白质称为
了一线技术支持常被问到的问题，希望这篇纯干货能帮助大家顺利升级打怪，早日驾驭 IP、co-IP。 IP、co-IP、pull-down 简介 IP（Immunoprecipitation），免疫沉淀：是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等基质上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的一种方法 Co-IP（co-Immunoprecipitation），免疫共沉淀： co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法，其基本实验流程和IP类似，通过使用诱饵蛋白（IP 中的抗原，bait protein）特异
