- ￥2414.02
- Corning
- 430167
- 康宁
- 2025年07月18日
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康宁
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430167
Corning® 经组织培养处理的培养皿
D × H 100 mm × 20 mm
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文献和实验人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
台中，使用体积设置为 10 µL的无菌 20 µL 移液器吸头从 60 mm 培养皿中6个较完整的类器官，并将其转移到 96 孔 U 型底板的 1 个孔中。 6. 将 96 孔板从解剖台转移到组织培养超净台中。 注意：为避免 ECM基质胶过早凝胶化，我们建议一次制备不超过 3 个细胞培养小室。 1. 将 60 µL 冷的 100%的减生长因子(GFR) ECM基质胶加入步骤 5 中的 96 孔板的每个孔中。通过移液器轻轻混合几次，避免产生任何气泡。 总体积 = 每孔130 µL。
。为使转化效率达到最高，质粒DNA应用CsCl-溴化乙锭密度梯度平衡离心法纯化。如果所用DNA量较少，应加入载体DNA将DNA浓度调至40μg/ml。实验室制备的真核载体DNA转染效率通常要比商品化的牛胸腺DNA、鲑鱼精DNA高。载体DNA用前应通过乙醇沉淀或氯仿抽提进行灭菌。 （2）转染前24h用胰蛋白酶进行消化以获得对数生长期的细胞，以1～2×105 细胞/cm2 的密度重新种入60mm组织培养皿中。在37℃、5%～7%CO2 及一定湿度的培养箱中培养20～24h。
本篇中主要介绍生化方法及物理方法（电穿孔法）一、生化方法1、磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞（1）转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。（2）按照下属方法制备磷酸钙-DNA沉淀：于5 ml灭菌塑料管内混合100μl 2.5 mol/L CaCl2与25μg质粒DNA，如有必要用0.1×TE（pH7.6）将体积补
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