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- 2025年07月16日
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Protein A PET Particles
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百欧泰(biotyscience)
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文献和实验1 to 4 of protocol 1 , but omit IPTG in step 4) Cells expressing protein fusions and an untagged RNA template (pET plasmid, Novagen)
本帖姐妹篇： 【原创】蛋白质纯化武器－设备篇（欢迎补充） http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15120322&sty=3&keywords=%B4%BF%BB%AF%CE%E4%C6%F7 （这篇小文可是上过丁香园的头版哦，还曾给配了个好看的图片，感谢） 【资源】蛋白质纯化武器－资料篇（欢迎补充） http://protein.dxy.cn/bbs/topic/17703087 条条大路通罗马，纯化之路千万条。本篇是写给蛋白
一刀切。而且，破菌缓冲液还与是否可溶表达相关。对于可溶表达的重组蛋白，一般就选用第一步层析纯化的平衡缓冲液为破菌缓冲液。对于不可溶表达的重组蛋白，最简单的就是选用PBS为破菌缓冲液。 在选用破菌缓冲液时，有个小小的trick，加EDTA。有个别重组蛋白很脆弱，在超声破菌时就有大量的降解。注意，不是表达降解，而是超声过程中降解。特别是用pET32表达的his-tag融合蛋白容易降解，我运气好，遇到过2次这种超声降解。第一次碰到时，害得我好苦。反复找原因，是诱导表达温度？是超声温度
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