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- BestBio贝博
- BB-41044-50T
- 上海
- 2025年07月07日
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贝博
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2-8℃
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50T
当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期。因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 7AAD为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。
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文献和实验1. 收集样本细胞，细胞数量在5-10X106个。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。
3. 在15ml离心管中，用500ul PBS重悬细胞。
4. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定过夜或-20℃固定1小时。
5. 取5X106细胞，在15ml锥形离心管中1000×g离心10分钟，弃上清，收集细胞。
6. 用冷PBS洗涤细胞两次。
7. 用500ul冷PBS重悬细胞。
8. 加入Rnase A溶液20ul， 37℃水浴30分钟。
9. 用400目细胞筛网过滤。
10. 在1000×g离心10分钟，弃上清，收集细胞。
11. 用500ul PBS重悬细胞。
12. 加入5ul 7-AAD染液，充分混匀， 4℃避光孵育30分钟-1小时。
13. 流式检测结果。激发波长为488nm。发射波长647nm。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
（Araujo 等人， 2016 年； Sakaue-Sawano 等人， 2008 年）。 其中一种探针是基于荧光泛素化的细胞周期指示剂 FUCCI (CA)，由 Miyawaki 及其同事开发（Sakaue-Sawano 等人， 2017 年），它监控 Cdt1 和联会蛋白（两种重要的细胞周期蛋白）的降解，产生 G1、S 和 G2 期（红色、绿色和黄色）的清晰三色分离，可在显微镜的 YFP 和 mCherry 通道中观察到（图 2）。 图 2. 使用 FUCCI(CA) 探针测量细胞周期的 G1
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