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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
Non-enzy Cell Detach Solution
- 供应商:
上海联祖
- 规格:
100mL
| 中文名称 | 无酶细胞消化液 | 英文名称 | Non-enzy Cell Detach Solution |
| 产品规格 | 100mL | 发货周期 | 1~3天 |
| 货号 | LZ-PYJ4434 | 用途 | 仅供科研实验 |
简便 大多数无需高压灭菌即可使用
特异 目标菌落色泽鲜艳,易于辨识
可靠 经大量分离株验证,符合率高
快速 最快检测时间为24h
节省 大批量样本的处理和检测,可减少补充生化试验的时间和费用
标准化 显色培养基已经普遍得到FDA、AOAC等国外官方的认可,被逐步引入到各种国际和国家检验标准中
无酶细胞消化液不含胰蛋白酶等蛋白消化酶类,但能有效地使贴壁细胞与培养瓶皿表面脱离而达到分离细胞目的。消化后的细胞可进行传代培养,亦可用于提取核蛋白和胞浆蛋白、Western Blot、免疫共沉淀等实验,通常室温下10min左右就可以消化下大多数贴壁细胞,该消化液适用于消化肿瘤、脑、肝、肾、肺组织等,尤其适用于上皮组织。
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶经常用于动物组织的培养细胞消化或者一些组织的消化,但对细胞有的潜在损害,尤其是在37℃环境下危害较大。
作用温和;
对细胞的损伤和破坏小,不影响细胞生物学特性,是肿瘤细胞的好细胞脱壁方法;
可以在血清存在的情况下进行消化。
产品组分
无酶细胞消化液 100mL
说明书 1份
保存:室温,有效期1年。
PBS、培养液
显微镜
离心机
尽量减少反复冻融的次数,以免失效。
在使用细胞消化液的过程中,要特别注意避免消化液被细菌污染。
细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
贴壁细胞的消化
吸除培养液,用无菌PBS、培养液洗涤细胞1次。
加入少量无酶细胞消化液,略盖过细胞即可(一般按细胞的有效体积的10倍添加)。
室温放置10min,如置于37℃脱壁反应会加速,直到细胞完全脱壁,不同的细胞消化时间有所不同。亦可显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除消化液。
加入细胞培养液或5倍体积PBS缓冲液终止反应。如果发现消化不足,则加入无酶细胞消化液重新消化。
1000~2000g离心3~5min,沉淀细胞,弃上清,尽量去除无酶细胞消化液,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
组织的消化
PBS、培养液清洗组织1次,用无菌的刮勺或茶匙将剪碎的组织碎片转移至合适容器。
按组织有效体积的5~10倍,加入无酶细胞消化液。
置于37℃作用4~48h,无需振荡,不同的细胞消化时间有所不同。对于较难分解的肿瘤细胞,可作用5天或更长时间,但应重新用消化液悬浮。
吹打组织碎片数次,释放松散的细胞,轻轻晃动培养瓶或皿,倒置显微镜下检查分离情况,当细胞量少和/或在组织碎片中仍可见细胞时,需要继续消化。
1000~2000g离心3~5min,沉淀细胞,弃上清,尽量去除无酶细胞消化液,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
一、培养基颜色不正确
(1)含有酸碱指示剂的培养基,若颜色不正确,通常是由于pH不正确导致的,加热过度、错误的灭菌方式等都会导致此项问题。
(2)加热过度导致某些成分分解或糖焦化,如SC培养基(SC增菌液)加热过度会变红,含糖量高的培养基,加热过度通常会出现颜色加深,呈焦糖色或棕褐色。
(3)某些成分变质,如血液久置易变黑,制成的平板颜色偏棕黑色。
二、 培养基不凝固或凝固性差
(1)称量错误
(2)琼脂分布不均匀
(3)培养基pH不正确
(4)加热过度
(5)琼脂量不足
三、培养基产生沉淀
(1)某些培养基原本就含有不溶性沉淀,如TTB,MC培养基等,配方中含有大量不溶性碳酸钙。
(2)灭菌前未充分溶解,如Fraser培养基中含有大量磷酸盐,若灭菌前溶解不充足,灭菌后就会出现大量沉淀。
(3)pH不正确,偏酸或偏碱都有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。
(4)水的纯度不够,天然水中含有较多的矿物盐离子,若未除净,则易与培养基中的磷酸盐反应生成沉淀。
(5)添加剂加入温度不正确,卵黄、血液等对温度敏感的添加成分,若加入时温度过高或温差过大,易出现凝块。
(6)称量错误。
(7)试剂加入顺序不正确。
通用型vero毒素大肠杆菌志贺氏毒素-1(VTEC - Shigatoxin 1)
基因检测试剂盒
通用型vero毒素大肠杆菌志贺氏毒素-2(VTEC - Shigatoxin 2)基因检测试剂盒
通用型诺瓦克病毒基因检测试剂盒
通用型幽门螺杆菌Helicobacter pylori基因检测试剂盒
Hb-AGE ELISA Kit
Thymosin ELISA Kit
TP-5 ELISA Kit
IAA ELISA Kit
PP ELISA Kit
冰冻切片组织P16蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
载玻片细胞P16蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
细胞P16蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒
CDK6蛋白表达ELISA定量检测试剂盒
CDK6蛋白免疫共沉淀分析试剂盒
6-Aminonicotinic acid
3-Amino-2-naphthoic acid
(S)-(-)-2-Amino-3-methyl-1,1-diphenyl-1-butanol
2-Amino-4-methoxybenzothiazole
4-Amino-N-methyl
无酶细胞消化液GD培养基基盐/Gresshoff & Doy培养基基盐(不含维生素) Gresshoff & Doy Base Salts 50L
KM培养基基盐/Kao & Michayluk培养基基盐(不含维生素) Kao & Michayluk Base Salts 50L
Litvay培养基基盐(不含维生素) Litvay Base Salts 50L
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文献和实验胰酶使用注意:1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。贴壁细胞的消化:1、吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清2、加入少量胰酶细胞消化液,略盖过细胞即可,根据胰酶效率差异可以增加惑减少胰酶用量。室温放置30秒至2分钟(不同的细胞消化时间有所不同)3、显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状;或者用枪吹打
易造成细胞膜损伤而出现细胞坏死的假阳性,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-荧光素的结合从而干扰对于细胞凋亡的检测。同时,胰酶细胞消化液中应尽量不含EDTA,因为EDTA可能会影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。 加入步骤1中收集的细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻悬浮细胞并计数。 注意:加入细胞培养液非常重要,一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞,另一方面细胞培养液中的血清
温和,对细胞损伤较小,但是,价格也较贵。中止同样是用血清。 二、离子螯合剂:不破坏细胞表面分子 ,仅与CAMs螯合,因此,如果检测细胞表面分子的话,尽量,甚至是一定不要用酶消化法。 1、EDTA 。用得也是非常多。一般浓度在0.02%左右。作用于细胞与间质,对细胞间也有一定作用。注意,它能显著影响pH值,而且在弱碱性条件下才易溶。因此,配制时应调节好酸碱度。它不能被终和。因此,消化下来的细胞要洗一遍。 2、商品化的无酶消化液。个人的使用经常觉得对细胞的损伤
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