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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
Trypsin-EDTA solution(0.25%:0.02%)
- 供应商:
上海联祖
- 规格:
100mL
| 中文名称 | 胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%) | 英文名称 | Trypsin-EDTA solution(0.25%:0.02%) |
| 产品规格 | 100mL | 发货周期 | 1~3天 |
| 货号 | LZ-PYJ4429 | 用途 | 仅供科研实验 |
本制品由0.25%胰酶、0.02%EDTA等组成,经过滤除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化,通常室温下1min左右就可以消化下大多数贴壁细胞。
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将蛋白质水解为肽,进而分解为氨基酸,其最适温度约为37℃。
产品组成
胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%) 100mL
说明书 1份
保存:-20℃,有效期1年。
自备材料
PBS、Hanks液或无血清培养液
显微镜
离心机
注意事项
尽量减少反复冻融的次数,以免失效。
在使用Trypsin-EDTA solution过程中,要特别注意避免消化液被细菌污染。
Trypsin-EDTA solution消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
贴壁细胞的消化
吸除培养液,用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
加入少量bjbalb Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置0.5~2min,不同的细胞消化时间有所不同。
显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
如果发现消化不足,则加入Trypsin-EDTA solution重新消化。
如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g离心1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
组织的消化
不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
简便 大多数无需高压灭菌即可使用
特异 目标菌落色泽鲜艳,易于辨识
可靠 经大量分离株验证,符合率高
快速 最快检测时间为24h
节省 大批量样本的处理和检测,可减少补充生化试验的时间和费用
标准化 显色培养基已经普遍得到FDA、AOAC等国外官方的认可,被逐步引入到各种国际和国家检验标准中
一、培养基颜色不正确
(1)含有酸碱指示剂的培养基,若颜色不正确,通常是由于pH不正确导致的,加热过度、错误的灭菌方式等都会导致此项问题。
(2)加热过度导致某些成分分解或糖焦化,如SC培养基(SC增菌液)加热过度会变红,含糖量高的培养基,加热过度通常会出现颜色加深,呈焦糖色或棕褐色。
(3)某些成分变质,如血液久置易变黑,制成的平板颜色偏棕黑色。
二、 培养基不凝固或凝固性差
(1)称量错误
(2)琼脂分布不均匀
(3)培养基pH不正确
(4)加热过度
(5)琼脂量不足
三、培养基产生沉淀
(1)某些培养基原本就含有不溶性沉淀,如TTB,MC培养基等,配方中含有大量不溶性碳酸钙。
(2)灭菌前未充分溶解,如Fraser培养基中含有大量磷酸盐,若灭菌前溶解不充足,灭菌后就会出现大量沉淀。
(3)pH不正确,偏酸或偏碱都有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。
(4)水的纯度不够,天然水中含有较多的矿物盐离子,若未除净,则易与培养基中的磷酸盐反应生成沉淀。
(5)添加剂加入温度不正确,卵黄、血液等对温度敏感的添加成分,若加入时温度过高或温差过大,易出现凝块。
(6)称量错误。
(7)试剂加入顺序不正确。
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文献和实验问:请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用!多谢!答:1、胰酶是0.25%,这是质量体积比,就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意,尽量不要用水来溶,因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%-0.1%,根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的,容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响,因此使用时要甚重。如果影响贴壁,但消化时必须要用,那么在用完全培养基终止消化后,可离心弃上清,再加完全培养基培养,可去除EDTA。如果对贴壁没
实验材料: 1. 细胞来源:新生儿包皮; 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2; 3. 0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液:两者比例为1:1,用D-Hanks液配制; 4. 0.02%大豆胰蛋白酶抑制剂:用DMEM培养液配制; 5. 生长基质:人纤维连接蛋白,按10μg/cm2 包被培养皿; 6. DMEM培养液:DMEM培养基,加10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100
实验材料: 1. 肺组织:取自妊娠14—18周的胎儿; 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2; 3. 消化液:0.25%胰蛋白酶(pH7.6—7.8),0.02%EDTA溶液; 4. 培养液:DMEM或RPMI1640,加10%—20%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml; 5. 保存液:10%二甲亚砜或10%甘油; 6. 眼科剪、眼科镊等无菌消毒手术器械;
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