病毒RNA提取试剂盒，阿拉丁

本试剂盒采用可以特异性结合病毒RNA的吸附柱和独特的缓冲液系统，适用于从 血清、血浆、尿液、脑脊液等无细胞体液及细胞培养上清液中分离病毒RNA。病毒 RNA特异性地结合到硅基质膜上，而污染物则流过该膜。通过两次高效洗涤完全去除 蛋白质等杂质，然后用无RNase的水或试剂盒提供的RNase-Free Water洗脱高纯度的 病毒RNA。由本试剂盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time RT-PCR和印 迹分析等实验。

自备试剂：无水乙醇，0.9% NaCl。 

实验前准备及重要注意事项 

1．向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。 配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。 

2．预防RNase污染，应注意以下几方面： 

1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。 

2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸 泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。 

3）配制溶液应使用无RNase的水。 

4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。 

3．血清或血浆避免反复冻融导致蛋白变性或产生沉淀，减少病毒滴度进而影响提取病 毒核酸的产量。 

4．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。 

5．Buffer GL如果产生沉淀，可在56℃加热使其溶解后室温放置。 

6．所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤 

1．室温下取200 μl血清或血浆加到1.5 ml离心管（自备）中。 注意：不足200 μl可以加入0.9 % NaCl （客户自备）补足。 

2．向上步溶液中加入20 μl Proteinase K，混匀。 

3．加入200 μl Buffer GL，涡旋震荡15秒。 注意：不要直接把Proteinase K加到Buffer GL中。 

4．56℃ 孵育15分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。 

5．加入250 μl无水乙醇，涡旋震荡15秒，室温孵育5分钟，短暂离心，将管壁上的溶液 收集到管底。 

6．将步骤5得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns RS）中，若一 次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，12,000 rpm（~13,400×g）离心1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 

7．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW1，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液， 将吸附柱重新放回收集管中。 

8．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2（使用前检查是否加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 

9．向吸附柱中加入500 μl无水乙醇，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液， 将吸附柱重新放回收集管中。 

10.12,000 rpm 离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底 晾干。 

注意：

1）这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、 PCR 等）。 

2）推荐步骤：将吸附柱放入一个新的1.5 ml离心管（自备）中，打开管盖，56℃烘箱孵育3分钟， 使吸附柱的膜彻底干燥。 

11.将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-50 μl RNase-Free Water，室温放置5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集RNA溶液， -70℃保存RNA，防止降解。 

注意：

1） RNase-Free Water体积不应小于20 μl，体积过小影响回收率。 

2） 如果要提高RNA的产量，可用20-50 μl新的RNase-Free Water重复步骤11。 

3） 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤11。