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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20°C储存
- 英文名:
Taq antibody
- 库存:
期货
- 供应商:
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格:
T295097-200U
产品简介
Taq antibody 是抗 Taq DNA polymerase(货号:T295056) 的单克隆抗体,其与 Taq DNA polymerase 结合后抑制 Taq DNA polymerase 的聚合酶活性。Taq antibody 与 Taq DNA polymerase 的亲和力非常高,即使在 65℃下仍然可以封闭 Taq DNA polymerase 的活性,因此可以非常有效地抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq antibody 只需要在 95℃加 热 30 sec 即可完全失活,释放 Taq DNA polymerase 活性,适用于各种基于 Taq DNA polymerase 的热启动 PCR、qPCR 反应。
使用方法
将 Taq DNA Polymerase (5U/μl) (货号:T295056)和 Taq antibody (5U/μl) 等体积混合后,37℃下孵育 4 h,即为热启动型 Taq DNA Polymerase (2.5U/μl)。
梯度测试确定反应比例
1. 选择数对在 Taq DNA Polymerase 单独扩增时易于产生引物二聚体产生或者非特异性扩增的引物;
2. 依据下表配制抗体与 Taq DNA Polymerase 反应体系(可依据需求进行进一步细化)
3. 37℃孵育4h;
4. 配制 PCR 反应体系,反应后进行凝胶电泳分析,判断最适反应比例。
质量控制
a. 蛋白纯度:经 SDS-PAGE 电泳检测,蛋白纯度大于等于90%。
b. 活性封闭检测,将封闭后的 Taq DNA Polymerase 在 50℃孵育 4 h, 活性释放 <5%。
c. 热启动检测:将封闭后的 Taq DNA Polymerase 在 95℃孵育 30 s 后,≥95% 的聚合酶活性得到释放
d. 核酸外切酶残留检测:将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。
e. 非特异性内切酶活性检测:最适反应温度下,将 1 μl Taq antibody 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。
f. 宿主残留检测:将酶液中残留的核酸经特异性的 TaqMan qPCR 检测,宿主基因组残留低于 10 拷贝。
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文献和实验人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
到每个细胞培养小室中。 等待 5 分钟,让 ECM基质胶固化。 4. 同时,将一孔浮肺芽类器官 (LBO) 转移到 60 mm培养皿中。 在单独的 96 孔 U 型底板中,向每个孔中加入 60 µL 3dGRO™ 肺类器官成熟培养基 (SCM308)。 注意:培养至20-25 天,会有许多漂浮的肺类器官(图 3)。 每个 ECM基质胶 包埋夹层应包含大约 4-6 个类器官。根据您计划制作的 ECM基质胶包埋夹层的数量,计算96 孔板中制备类器官/ECM基质胶悬浮液所需的孔总数。 5. 在无菌解剖
计算出底物消耗速度或产物生成速度,将速度换算为μmol/min即是以国际单位表示的酶活性。 例如: 假设某一样品种的酶活性记为X U/L,取样品量VS(mL)与底物缓冲液Vr(mL)孵育,t min后加入终止液Ve(mL),检测到的净吸光度增加为A,该产物的摩尔消光系数为ε(一般可通过带标准求得),比色皿光径为 b cm。③ 连续监测法计算 酶与底物在特定条件下孵育,每隔一定时间(2-60 s)连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化,从而计算出每分钟的信号变化速率。连续监测法
所不能替代的,如限制性酶切片段的多态性 (RFLP) 的检测等。一、基因组 DNA 的制备(前述)二、基因组 DNA 的限制酶切根据实验目的决定酶切 DNA 的量。一般 Southern 杂交每一个电泳通道需要 10-30 μg 的 DNA。购买的限制性内切酶都附有相对应的 10 倍浓度缓冲液,并可从该公司的产品目录上查到最佳消化温度。为保证消化完全,一般用 2-4 U 的酶消化 1 μg 的 DNA。消化的 DNA 浓度不宜太高,以 0.5 μg/μl 为好。由于内切酶是保存在 50% 甘油
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