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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20°C储存;避免反复冻融
- 英文名:
2xEs Taq MasterMix
- 库存:
期货
- 供应商:
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格:
E665629-5ml/E665629-25ml
| 规格: | E665629-5ml | 产品价格: | ¥387.9 |
|---|---|---|---|
| 规格: | E665629-25ml | 产品价格: | ¥1347.9 |
本品是由Es Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成 的预混体系,浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良 性能。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,超过98%的PCR扩增能一次成 功,同时复杂模板也能得到有效扩增,并可最大限度地减少人为误差和污染。本品不 含染料,PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到 的大部分PCR产物3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规 PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。
Notes: 2×Es Taq MasterMix contains Es Taq DNA Polymerase, 3mM MgCl2 and 400µM each dNTP. |
质量控制:
经检验无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增多种基 因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实 际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
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注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高 引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
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注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降 低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Es Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太
多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
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文献和实验【分享】Taq DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶等酶的特点及应用
扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板:Taq Plus、Long Taq、Taq Platinum 实时荧光定量PCR反应:Taq、Hotstart Taq、Taq Platinum 从菌株或质粒模板,筛选鉴定目的克隆,扩增6kb以下的片段:Taq、Taq Plus、2×Taq PCR MasterMix 模板比较复杂或目的片段丰度低,用普通Taq酶扩增不出条带:2×Taq PCR MasterMix、2×Pfu PCR MasterMix
,Taq PCR MasterMix 扩增产物可用于 T/A 克隆。本产品加入特殊稳定剂,37 ℃ 温度下 48 h仍然保持 95% 以上的扩增效率.储存条件: -20 ℃ 一年有效,多次冻融不会影响活性,经常使用可放置于 4 ℃。 本品为适应大部分 PCR 反应需要,Taq 酶量是按照 PCR 反应酶量上限所加,如出现 PCR 反应非特异性扩增明显或者背景过高,可将 Taq PCR MasterMix 反应液适当稀释后使用,可改善 PCR 扩增效果。 PCR 反应液: 组成成分 50
荧光定量PCR反应(可选产品:Taq、Hotstart Taq、Taq Platinum) 7.从菌株或质粒模板,筛选鉴定目的克隆,扩增6kb以下的片段(可选产品:Taq、Taq Plus、2×Taq PCR MasterMix) 8.模板比较复杂或目的片段丰度低,用普通Taq酶扩增不出条带(可选产品:2×Taq PCR MasterMix、2×Pfu PCR MasterMix)
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