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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20°C储存;避免反复冻融
- 英文名:
2×Super Pfx Master Mix
- 库存:
期货
- 供应商:
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格:
S665634-5ml/S665634-1ml
| 规格: | S665634-5ml | 产品价格: | ¥1497.9 |
|---|---|---|---|
| 规格: | S665634-1ml | 产品价格: | ¥387.9 |
本产品为由Super Pfx DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及反应缓冲液组成的优化的2×预混型 试剂,只需要添加引物和DNA模板即可进行PCR反应。Super Pfx DNA Polymerase具有3´→5´外 切酶活性,其保真性约为Taq DNA聚合酶的100倍,是克隆的理想选择。该酶通过引入延伸增 强技术,在维持高保真性的同时,实现了延伸速度10sec/kb的高速PCR,扩增长度可达20kb。 此外,本产品在兼具高成功率的同时,对于扩增反应困难的长片段、GC-rich区域和过量模板 也可以进行扩增。扩增得到的PCR产物的3´端不带有“A”碱基,可直接克隆于平末端载体中。 本产品分为不含Loading Dye的标准型2×Master Mix和含有Loading Dye 的2×Master Mix。
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保存条件:-20℃保存。
产品内容
产品特征
1. 可进行高速PCR
扩增1kb以下的目的片段时,延伸时间可设为10sec。扩增1-10kb的目的片段时,延伸时间可 设为20-30sec/kb。相比以往试剂可大幅度缩短PCR的反应时间。
2. 高保真性
保真性约为Taq DNA polymerase的100倍,长目的片段也可以迅速且高保真性地扩增,扩增产 物可用于多种用途。
3. 简便
本试剂中包含所有除引物、模板以外的其他PCR组分,便于操作的同时也提高了实现结果的重 现性。另外,2×Super Pfx Master Mix(Dye)中含有 Loading Dye,反应 结束后,可直接点样进行凝胶电泳。
注意事项
带有尿嘧啶的引物和模板不适用于本产品。
使用说明
PCR反应体系
1. 反应液制备前,请将试剂完全融解、混匀后再使用。
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・组分添加完后请混合均匀并迅速转移到PCR仪里。
・引物终浓度推荐为0.4-0.5μM,但扩增10kb以上的长片段时,引物终浓度为0.3μM可提高扩增产物量。
PCR反应程序
1. 反应液制备前,请将试剂完全融解、混匀后再使用。
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注意:
1)预变性:对于多数纯化后的模板,98℃,30sec即可;对于复杂模板可延长预变性时间,不超3min。
2)退火:一般实验中退火温度比引物Tm低3-5℃,发生非特异性反应时,适当提高退火温度。如果需要, 可以建立一个温度梯度寻找引物与模板结合的最适温度。对于高Tm的引物,可以使用两步循环,将退火和 延伸合并为一步。
3)延伸:对于复杂的基因组样本,延伸时间通常为20-30sec/kb,但对于简单模板(质粒、大肠杆菌等)或
<1kb的复杂模板,延伸时间可缩短至10sec/kb。如果需要,cDNA或>6kb的复杂模板,延伸时间可以增
加到40-50sec/kb。
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文献和实验充分的准备是实验成功的关键,那么,qPCR 实验需要提前做好哪些了解呢? 试剂的储存条件 市面上大多数 qPCR 试剂推荐 - 20 ℃ 避光长期储存。 Vazyme 的 ChamQTM 和 AceQ® 两个系列的 qPCR Master Mix,长期储存应置于 - 20 ℃ 避光,解冻后可于 4 ℃ 短暂存放;避免反复冻融。 原始模版稀释倍数 尽量选择 Ct 值落在 15 - 28 范围的稀释倍数作为原始模板稀释度。 反应体系与次数 推荐 20 μl 体系,Vazyme
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结论 经过实验对比可看出BioTeke公司的2×SYBR real-time PCR premixture Kit是三家公司中扩增效率最高、特异性最好的,并且比ABI公司的Power SYBR Green PCR Master Mix具有更高的扩增效率,更好的特异性。说明,BioTeke公司的试剂质量绝不亚于国际知名公司的产品。
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