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2×Super Pfx Master Mix,阿拉丁

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  • ¥387.90 - 1497.90
  • 阿拉丁已认证
  • 上海
  • S665634
  • 2025年07月15日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20°C储存;避免反复冻融

    • 英文名

      2×Super Pfx Master Mix

    • 库存

      期货

    • 供应商

      上海阿拉丁生化科技股份有限公司

    • 规格

      S665634-5ml/S665634-1ml

    规格:S665634-5ml产品价格:¥1497.9
    规格:S665634-1ml产品价格:¥387.9

    本产品为由Super Pfx DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及反应缓冲液组成的优化的2×预混型 试剂,只需要添加引物和DNA模板即可进行PCR反应。Super Pfx DNA Polymerase具有3´→5´外 切酶活性,其保真性约为Taq DNA聚合酶的100倍,是克隆的理想选择。该酶通过引入延伸增 强技术,在维持高保真性的同时,实现了延伸速度10sec/kb的高速PCR,扩增长度可达20kb。 此外,本产品在兼具高成功率的同时,对于扩增反应困难的长片段、GC-rich区域和过量模板 也可以进行扩增。扩增得到的PCR产物的3´端不带有“A”碱基,可直接克隆于平末端载体中。 本产品分为不含Loading Dye的标准型2×Master Mix和含有Loading Dye 的2×Master Mix。 

    S665634Component1 mL5 mLStorage
    S665634A2×Super Pfx Master Mix1 mL 5×1 mL-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
    S665634BddH₂O
    1 mL 5×1 mL-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

    保存条件:-20℃保存。 

    产品内容

    产品特征

    1. 可进行高速PCR

    扩增1kb以下的目的片段时,延伸时间可设为10sec。扩增1-10kb的目的片段时,延伸时间可 设为20-30sec/kb。相比以往试剂可大幅度缩短PCR的反应时间。

    2. 高保真性  

    保真性约为Taq DNA polymerase的100倍,长目的片段也可以迅速且高保真性地扩增,扩增产 物可用于多种用途。 

    3. 简便

    本试剂中包含所有除引物、模板以外的其他PCR组分,便于操作的同时也提高了实现结果的重 现性。另外,2×Super Pfx Master Mix(Dye)中含有 Loading Dye,反应 结束后,可直接点样进行凝胶电泳。  

    注意事项

    带有尿嘧啶的引物和模板不适用于本产品。

    使用说明  

    PCR反应体系

    1. 反应液制备前,请将试剂完全融解、混匀后再使用。

    组分

    25μL 反应体系

    50μL 反应体系

    终浓度

    2×Super Pfx Master Mix

    12.5μL

    25μL

    Forward Primer,10 µM

    1-1.25μL

    2-2.5μ

    0.4-0.5μM

    Reverse Primer,10 µM

    1-1.25μL

    2-2.5μL

    0.4-0.5μM

    Template DNA

    可变量

    可变量

    基因组DNA~500ng /50μL质粒或病毒~50ng /50μL cDNA(RNA 相当量)~750ng/50μL

    ddH2O

    Up to 25μL

    Up to 50μL


    ・组分添加完后请混合均匀并迅速转移到PCR仪里。 

    ・引物终浓度推荐为0.4-0.5μM,但扩增10kb以上的长片段时,引物终浓度为0.3μM可提高扩增产物量。

      PCR反应程序

     1. 反应液制备前,请将试剂完全融解、混匀后再使用。

     

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性1)

    98℃

    30sec

    /

    变性

    98℃

    5-10sec

    25-35个循环

    退火2)

    根据引物Tm定

    10-30sec

    25-35个循环

    延伸3)

    72℃

    20-30sec/kb

    25-35个循环

    终延伸

    72℃

    5min

    /

    注意:

    1)预变性:对于多数纯化后的模板,98℃,30sec即可;对于复杂模板可延长预变性时间,不超3min。 

    2)退火:一般实验中退火温度比引物Tm低3-5℃,发生非特异性反应时,适当提高退火温度。如果需要, 可以建立一个温度梯度寻找引物与模板结合的最适温度。对于高Tm的引物,可以使用两步循环,将退火和 延伸合并为一步。 

    3)延伸:对于复杂的基因组样本,延伸时间通常为20-30sec/kb,但对于简单模板(质粒、大肠杆菌等)或 <1kb的复杂模板,延伸时间可缩短至10sec/kb。如果需要,cDNA或>6kb的复杂模板,延伸时间可以增 加到40-50sec/kb。

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