2×Flash PCR MasterMix (Dye)，阿拉

产品内容

产品简介  

本品是由一款新型高效的快速DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂 和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。本产品为独创的新型快速DNA聚合 酶，具有极高的扩增速度与稳定性，延伸速度可达5 s/kb，最短十五分钟完成PCR，长 片段（大于3 kb）或者复杂模板可以采用10-30 s/kb的延伸速度或者较多循环数。独创 的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，同时复杂模板也能得到有效扩增，超过 98%的PCR扩增能一次成功。使用时只需要加入DNA模板和引物，补足水即可反应， 可最大限度地减少人为误差、降低污染和节约时间。 本产品已加入染料（蓝色），反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的PCR 产物3′端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆，并适用于无缝克隆试剂盒、T4连接试剂盒和感受态产品。 本产品主要适用于超快PCR、复杂模板、复杂二级结构、对高保真性有要求的基 因克隆等实验和大规模基因检测。

质量控制

经检验无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增多种基 因组中的单拷贝基因。

使用方法

 以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条 件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

PCR反应体系

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的 浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

PCR反应条件

注意： 1）注意：对于简单模板，预变性时间可控制在30 s-1 min,对于复杂模板如菌液等，预变性时间 可增加至2 min。 

优化参数设定

1. 模板DNA量设定： 

模板过量可能导致非特异性扩增或smear。50 μl PCR反应体系中模板DNA推荐使 用量如下：

 -人基因组DNA 5 ng-500 ng 

-大肠杆菌基因组DNA 50 pg-100 ng 

-质粒DNA 10 pg-1 ng 1. 30-35 个循环数 

2 .引物浓度设定： 引物浓度可设为0.1 μM-1.0 μM之间。引物浓度过低时可能导致扩增产物少。引物 浓度过高会抑制特异性扩增，可能导致非特异性扩增。 

3. 退火温度设定： 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率 时可适当降低退火温度；发生非特异性反应时可适当提高退火温度。对于复杂模 板，需要调节退火温度实现高效扩增。 

4. 延伸时间设定： 延伸时间应根据所扩增片段大小设定。以下为推荐的延伸时间： 质粒等简单模板：5-15 s/kb； 常规基因组、cDNA模板：10-15 s/kb； 复杂模板、粗提模板：20-30 s/kb； （延伸时间不宜过短应至少在5 s/kb以上，也不宜超过30 s/kb）。 

5. 循环数设定： 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果 循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前 提下应尽量减少循环次数。