LL-37 醋酸盐, 人组织蛋白酶抑制素的抗菌肽衍生物，15

内皮细胞免疫沉淀法制备硫酸蛋白多糖

内皮细胞培养至90~100% ↓ PBS洗细胞3遍（室温） ↓ 预热的蛋氨酸和无血清的培养基（MEM）LL nL 50 μM（分子量，383.5，50 mM，25 mg 溶于二甲基硫氧化物DMSO中1304 μl） 在37℃下孵育2小时。 ↓ 等同于（同步）MEM加1.5%BSA+10 μM LLnL50 μM 在37℃下孵育10分钟。 ↓ 置于冰上，预冷PBS洗细胞3次 ↓ 37℃温育2分钟 ↓ 放射性标记：细胞在代谢中以100 μCi

细胞增殖检测：CFSE

一、原理荧光染料CFSE， 也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl ester） 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入

酸性磷酸酶金属盐―铅法

水洗；④人孵育液，37C孵育2～4小时；⑤双蒸水洗2―3分钟；⑥入1％硫化铵液(新鲜配制)l一2分钟；⑦蒸馏水冲洗；⑧甘油明胶封固。3)结果与评价：阳性反应部位呈棕褐色硫化铅颗粒。该酶为可溶性酶，以冷固定效果较好，一般溶酶体膜为不通透性膜，但经冰冻熔化或福尔马林固定处理后，孵育液内的作用底物则进入溶酶体而被酶作用。酸性磷酸酶铅法染色大鼠肾小管上皮细胞呈棕色为酸性磷酸酶肛拦反应4)注意事项：孵育液内铅离子浓度是反应的关键因素，必须新鲜配制，立即使用。因为当铅离子浓度过低时，产生的磷酸离子未能完全被结合