含 0.1% (v/v) 乙酸的水，用于LC-MS, Chr

HPLC培训教程 V．HPLC应用

），以免泵损坏。     ③安装柱时，请注意流向，接口处不要留有空隙。     ④样品液请注意滤过（注射液可不需滤过）后进样，注意样品溶剂的挥发性。     ⑤测定完毕请用水冲柱1小时，甲醇30分钟。如果第二天仍使用，可用水以低流速（0.1~0.3ml/min）冲洗过夜（注意水要够量），不须冲洗甲醇。另外需要特别注意的是：对于含碳量高、封尾充分的柱，应先用含5~10%甲醇的水冲洗，再用甲醇冲洗。     ⑥冲水的同时请用水充分冲洗柱头（如有自动清洗装置系统，则应

含组氨酸标签的蛋白诱导表达及纯化操作指南！

袋中的蛋白，测定其 A280，加入相应体积的 Ni-NTA 树脂混匀，按与上清纯化相同的方法上柱纯化，但是 Wash buffer 和 Elution buffer 用包涵体纯化的 pH 递减的缓冲液。五、Ni-NTA 树脂的再生当 Ni-NTA 琼脂糖的颜色由浅蓝色变成灰褐色，此时 Ni-NTA 树脂需要再生后才能使用。所需试剂：再生缓冲液：6M 盐酸胍＋0.2M 乙酸2%SDS（m/V）25%，30%，50%，75% 的乙醇（V/V）100 mM EDTA，pH8.0100 mM NiSO4裂解缓冲

ZOOM® IPGRunner™系统：简化的双向电泳（2D gel eletrophoresis）

。每一个IPG Runner™夹盒可以进行6个IPG 胶条电泳。再水化后，移去密封带和加样孔，在IPG Runner™夹盒的每一端放置电极芯，电极芯用750μl的去离子水润湿。通过滤纸吸去过多的水分，以便电极芯保持潮而不湿。组装夹盒和缓冲液核心（buffer core），然后插入ZOOM® IPG Runner™ Mini-cell电泳槽（Invitrogen, Cat. no. ZM0001)。在Mini-cell电泳槽的外槽加入650ml水。接通电源进行等电聚集，电流限制50μA/胶条，功率限制