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- 文献和实验
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- 品系:
原代
- 细胞类型:
免疫细胞
- 肿瘤类型:
联系商家
- 供应商:
泽医原代细胞
- 库存:
1000
- 英文名:
Human PBMC
- 生长状态:
悬浮
- 年限:
10
- 运输方式:
液氮/干冰
- 器官来源:
外周血
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 细胞形态:
单核细胞
- 免疫类型:
联系商家
- 物种来源:
人
- 相关疾病:
无
- 组织来源:
外周血
PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells),即外周血单个核细胞,是血液中的一种重要细胞群体,主要由淋巴细胞(包括T细胞、B细胞和NK细胞等)、单核细胞和树突状细胞等组成。它们在人体的免疫系统中扮演着关键角色,参与免疫应答和免疫调节。PBMC可从健康人的单采样本,通过密度梯度离心工艺得到,主要包括淋巴细胞和单核细胞。主要用于免疫学研究、传染病研究、肿瘤免疫、疫苗研发、毒理学研究以及基于PBMC的多能干细胞研究的个体化治疗。
- 免疫调节药物的临床前药效学和药代动力学研究
- PD-1/PD-L1单克隆抗体临床前安全性和有效性评价
- 双特异性抗体临床前研究
- 人源化肿瘤免疫模型(PDX)小鼠药效学研究
- 生物制剂药物的免疫毒性和免疫原性研究
- 纳米抗体药物临床前评估
- 疫苗安全性和免疫调节治疗效果评价
- 药代动力学研究
- 中药的体外药效学研究
产品规格:

服务优势




冻存PBMC复苏操作
外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),其主要包括两大类细胞,分别是淋巴细胞(Lymphocyte)和单核细胞(Monocyte),其中淋巴细胞又包括T淋巴细胞,B淋巴细胞和NK细胞。泽医提供从Leukopak中使用密度梯度离心法分离纯化的PBMC。
一、试剂耗材
² 复苏培养基(10%灭活FBS的DMEM/RPMI-1640完全培养基);
² 实验用培养基
² 移液枪;
² 15ml离心管;
² 水浴锅;
² 75%酒精;
² 离心机;
² 计数仪
二、细胞解冻
1、将完全培养基在37℃水浴锅中预热;
2、取15mL离心管加入3-5mL预热的完全培养基置于生物安全柜中备用;
3、从干冰/液氮中取出细胞,将冻存管尽可能多的浸入液面以下(至少冻存液部分全部在液面以下),确保管盖在液面上方,在37℃水浴锅中轻柔水平画圈晃动冻存管使其快速融化,直到管内只剩小片冰晶,融化过程中可随时观察融化情况,大约耗时120s;
4、用75%酒精消毒冻存管外部后,将冻存管拿进生物安全柜中使用无菌纸或无菌布擦干管壁,然后开盖,将管内细胞悬液轻轻吹打混匀;
5、将细胞悬液滴加至已准备好完全培养基的15mL离心管中,吸1mL培养基润洗一下冻存管,然后盖上盖子颠倒混匀;
6、室温下,以300g的转速离心10分钟,转移上清至另一个干净的离心管中,以防离心后细胞数量发生较大偏差;
7、加入2mL实验所需培养基将细胞重悬,然后定容至5mL,混匀准备计数;
8、取10uL细胞悬液,按1:1混合AO/PI后使用计数仪计数或使用台盼蓝染色然后使用血球计数板计数,记录细胞活率和细胞密度;
9、下面提供血球计数板的计数办法:
N =血球计数板的4角大方框所数的所有细胞个数
d =稀释倍数
细胞数量/管=N÷4×2×d × mL= × 104
细胞活率=未被台盼蓝染色的细胞个数÷细胞总数×100%= %
10、计数之后根据实验需求,添加实验用培养基调整您需要的细胞密度进行接下来的实验。
三、备注
1、若您需要再次洗涤细胞,重复步骤6-8,每次洗涤会造成10-15%的细胞损失;
2、若离心后细胞数量低于预期,将步骤6的上清液再次离心,可使用400g/10min离心条件离心后重悬计数;
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文献和实验外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞(Lymphocyte)、单核细胞(Monocyte)、树突状细胞(DC)和其他少量细胞。 1 原理 单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其它细胞不同,红细胞和多核白细胞的比重超过1.080,单个核细胞的比重为1.070左右,血小板为1.030左右。因此,可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个
人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血,用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释,上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中,先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液(1.077 g/mL),再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液,血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注:Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温,温度过高会导致分离不明显,温度过低会导致密度过大,同样分离效果不好, 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移
1、将静脉血20ml用ACD抗凝剂以容积比血:抗凝剂=9:1抗凝处理 2、按血:分离液=1:2注入国产淋巴细胞分离液上层,400g 20℃离心30分钟 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g,10min洗三次 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会: 1、实验中我用过肝素方法抗凝,但效果不好,因为肝素抗凝后交接层混浊,洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂,效果very good 2、实验用的是国产淋巴细胞液(天津TBD),没有用过进口











