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德国NanoTemper
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【轻松、快速、精准检测分子间相互作用】
产品简介：
Monolith 系列分子互作仪，采用创新性的光谱位移技术（Spectral Shift） 和 经 典 的 微 量 热 泳 动 技 术 ( MicroScale Thermophoresis, MST)，轻松检测最具挑战的分子互作。仅需极微量的样品 , 即可在液体环境中快速、精确地定量检测各种类型的分子间相互作用力，且检测浓度范围广、操作简单。
技术原理
l 光谱位移技术：通过荧光发射光谱的蓝移或红移来检测分子间的结合。Monolith X 在等温条件下精确检测 650nm 和 670nm 双波长的发射光，因而能够精确检测到极细微的光谱位移。
l 微量热泳动技术：MST技术是通过激光在溶液中产生精确而短暂的温度变化从而检测配体结合引起的荧光强度变化。
以配体浓度为横坐标，荧光值为纵坐标作图，从而获得平衡解离常数 Kd.
产品优势：
• 双技术模块：可同时搭载光谱位移（Spectral Shift）和微量热泳动（MST）技术模块，可灵活升级
• 无需固定样品：可直接在溶液中定量检测
• 无惧分子量：各种分子互作轻松驾驭，蛋白质、核酸、多肽、小分子、离子、纳米颗粒等
• 节省样品：最低样品消耗量仅需 10μL，10分钟即可检测1个 Kd
• 智能优化：实时监测样本质量，并提供优化建议
• 无液流系统：无堵塞风险，免维护
产品优势 - 解决SPR难以应对的分子互作难题：
l 样品固定会阻碍 Kd 值的测定
SPR 中不合适的固定或再生条件会负面干扰配体结合。由于 Monolith 是在可控平衡条件下进行溶液内结合检测，因此可以帮助您测定固有无序蛋白（IDPs）等存在构象动态复杂变化的具有挑战性的样品。
l 待测分子与芯片基质间的非特异性结合
由于 SPR 无法区分待测分子是与固定在芯片上的样品还是芯片基质发生了结合，因此您还需要做进一步检测来识别和排除非特异性结合。而您在使用 Monolith 时无需专门检测此类非特异性结合，因为检测是在溶液内完成的。
l 强亲和力结合分析难度大
使用 SPR 评估强亲和力结合是极为困难的, 其原因是：强亲和力互作的解离速率极慢，而 SPR 需要通过解离速率来计算亲和力，因此您需要等待极长的时间才能准确测得此数据。而 Monolith 是直接检测结合，您完全无需等待。
l 检测共价结合
用 SPR 研究共价结合是非常繁琐的。而 Monolith 是直接在溶液内检测结合，您无需考虑如何再生芯片，这就使共价结合的检测变得非常容易。
应用方向：
蛋白质 - 小分子
蛋白质 - 蛋白质
蛋白质 - 离子
蛋白质 - 核酸
蛋白质 - 多肽
蛋白质 - 脂类
蛋白质 - 糖类
纳米颗粒
病毒颗粒
核酸适配体
细胞裂解液/血清
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文献和实验Monolith互作荣登Cell：清华/南方医大团队发现降低胆固醇新激素
01 研究背景
在生命科学领域，肠道吸收胆固醇和肝脏合成新胆固醇之间的相互平衡对维持胆固醇的平衡至关重要，然而人们对这些过程的调节机制仍然知之甚少。
本期案例研究首次发现并命名了一种肠道激素——Cholesin（肠抑脂素），并揭示了Cholesin在调控机体胆固醇稳态方面的作用和调控机制。Cholesin-GPR146信号轴介导了肠道胆固醇吸收和对肝脏胆固醇合成的抑制作用，这种新发现的激素胆固醇素有望成为防治高胆固醇血症和动脉粥样硬化的有效药物。
下面，让我们一起探究这篇近期发表在Cell的优质文章吧！
02 研究内容
近日，清华大学生命科学学院王一国副教授和南方医科大学南方医学院张惠杰教授在国际知名期刊Cell上发表了 “A gut-derived hormone regulates cholesterol metabolism” 的论文。在此项研究中，作者选用NanoTemper公司的Monolith分子互作仪进行其中肠抑脂素受体的验证工作，MST的技术优势不负众望并发挥了重要作用。
为了研究GPR146是否是Cholesin的受体，研究团队使用Monolith分子互作仪检测了Gpr146—/—在小鼠组织中Cholesin的结合情况。
在Gpr146—/—小鼠的组织和原代肝细胞中，Cholesin的结合完全消失。进一步的实验证实Cholesin与GPR146的结合具有很高的亲和力。根据GPR146的保守性和预测结构，研究团队通过将6个氨基酸与丙氨酸重置生成了GPR146的突变体。与WTGPR146相比，突变体GPR146对Cholesin的亲和力明显降低，并且无法恢复GPR146—/—原代肝细胞与Cholesin的结合。所有这些体外和体内结合实验都证明GPR146是Cholesin的受体。在此验证工作的基础上，科研团队继续开展后续的实验。
图1. 微量热泳动技术(MST)定量测定肠抑脂素-His与GPR146 (野生型或突变体)的结合亲和力。蓝色曲线代表的是野生型GPR146与肠抑脂素-His的结合，平衡解离常数是21.34±0.98 nM; 红色曲线代表的是突变型GPR146与肠抑脂素-His的结合。平衡解离常数是971.0±91.5 nM。
03 技术优势
在这篇科研工作中，通过微量热泳动（MST）技术检测到野生型和突变型肠抑脂素-His对GPR146结合的验证。该技术对于分子互作亲和力的检测，Monolith系列仪器不依赖于分子量的改变，蛋白用量少，可以在溶液中表征肠抑脂素-His与GPR146的亲和力，十分有利于蛋白的结构平衡。
技术资料