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- 2026年01月14日
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文献和实验成单层的L929细胞用0.25％胰酶消化2～3min。除去消化液后,用10% FCS的RPMI-1640将L929细胞配成1×105/ml,加入96孔细胞培养板中,每孔100μl。2、取100μl不同稀释度的IL-1标准品和待测品,分别加入各孔中,每孔设3个复孔,置37℃,5% CO2温箱孵育56h。3、用PBS溶解MTT为5mg/ml,用0.22μm膜滤器除菌及杂质。4、上述培养体系取出后,每孔加入10μl MTT(5mg/ml),37℃继续培养4h。5、从每孔吸出100μl上清弃去,加酸化异丙醇或加
)，EDTA(50mM和200mM)，TE饱和酶/氯仿，7.5mM NH4Ac，100%和70%乙醇，TE缓冲液(10mM Tris·Cl,pH8.0,1mm EDTA)。 2、操作步骤： （1）取一灭菌的无RNA酶的eppendorf管加入的RNA样品，及引物或引物-延接头，用H2O调节0.5mg引物/mg mRNA（或0.3mg NotⅠ引物-延接头/mg mRNA）的体积至15ml，70℃加热5分钟，待冷至室温，离心数秒钟使溶液集中在管底，然后依次加入： 5×第一链缓冲
）。 2、T4 DNA连接酶(T4 DNA ligase)；购买成品。 3、X-gal储液(20mg/ml): 用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的储液, 包以铝箔或黑纸以防止受光照被破坏, 储存于-20℃。 4、IPTG储液(200mg/ml): 在800μl蒸馏水中溶解200mg IPTG后,用蒸馏水定容至1ml,用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于eppendorf管并储于-20℃。 5、麦康凯选择性培养基(Maconkey Agar)：取52g麦康凯琼脂加蒸馏
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