Bradford蛋白浓度测定试剂盒

型号	LZ-01X9096
英文名称
产品规格	1盒
发货周期	1～3天

产品描述：

产品规格：
Bradford 染色液 100ml
BSA 标准品 20ml(2mg/ml)
产品描述：应用试管法可以测量100管，微孔板法可以测量400孔
产品保存：4℃保存，一年有效。
产品说明：Bradford 蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据 Bradford 染液(考马斯亮蓝 G-250 染料)与蛋白结合，使染料的最大吸收峰从 A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比 Lowry 法大约高四倍，最低蛋白检测量可达 1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。
注意事项：
1．各取样操作应准确无误。
2．在100～1500μg/ml的浓度范围线性最佳。
3．加入样品后的试剂，混合均匀后，静置反应，测量过程中切不要再次剧烈晃动。
4．Bradford 染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热 20min。
5．Bradford 染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
6．每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
7．Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。(详情见附录)对于含去垢剂的样品，建议使用BCA蛋白定量检测试剂盒。
使用说明：
一、配制 BSA 标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。
但也可用 0.9%的NaCl或1×PBS 进行稀释。
二、检测方法
A．试管法检测(线性范围：100-1500μg/ml)
1.各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中；
2.加入1ml Bradford 染色液，混匀。室温孵育10min。
3.分光光度计上测定 595nm 处的吸光度，用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
B．标准微孔板检测(线性范围：100-1500μg/ml)
1.各取 5μl 各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中；
2.每孔加入 250μl Bradford 染色液，振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板，室温孵育10min。
3.酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度，但是相对于595nm，吸光度会存在~10%的损失。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
注意：由于酶标板的光径比比色皿短，经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得，因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm，可使用 7-10μl 标准品/待检样本，和 250μlBradford 染色液来进行检测。


注意事项：
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！
试剂组分：


储存条件：

低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，
有效期一年。
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