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上海吉至生化科技有限公司
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文献和实验即 Monodansylcadaverine,单丹磺酰尸胺染色,包括自噬体,所有酸性液泡都被染色,故属于非特异性的。 5. CellTrackerTM Green 染色 主要用于双染色,但其能染所有的液泡,故也属于非特异性的。 自噬相关蛋白定位 在研究自噬相关蛋白时,需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体关系密切,为了区别,常用到一些示踪蛋白在荧光显微镜下来共定位:Lamp-2:溶酶体膜蛋白,可用于监测自噬体与溶酶体融合。LysoTrackerTM 探针:有红或蓝色可选,显示
毒素+FITC 2.标记细胞器荧光探针 (1)线粒体 Mitochondria Rodamin 123 505/534 ,可染活细胞,阳离子性,可检测线粒体膜电位, 且在多数细胞中停留时间短 JC1 线粒体膜电位低时为单体 490/527 发绿光 线粒体膜电位低时为多聚体 490/590 发红光 可标记活细胞线粒体,且为检测线粒体膜电 位最佳探针: Mitotracker Green FM 490/516, 染活细胞或固定
光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。 3、利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成 自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),因此,LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。 (注意:LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力,会造成假阳性。方法2和3需结合使用,同时需考虑溶酶体活性的影响。) 4、检测长寿蛋白的批量降解:非特异
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