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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
现货
- 保质期:
6个月
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50ul
产品简介
溶酶体是含有酸性水解酶以分解废物和细胞碎片的细胞器,其内部呈酸性(pH 4.5-4.8)。溶酶体通过质子泵和氯离子通道将质子从细胞溶质中泵出穿过膜,从而维持了这种pH差异。溶酶体绿色荧光探针Lyso-Tracker Green是荧光素 pH 指示探针,可以用来区分酸性细胞器,使得动态研究活细胞内溶酶体生物合成和功能成为可能。Lyso-Tracker Green表现出 pH 依赖性,在酸化条件下,荧光强度增加。用于检测酸化的溶酶体和细胞内溶酶体的功能改变,例如,在某些肿瘤细胞的溶酶体具有较低的 pH 值,而有的肿瘤细胞则相反。此外,一些细胞的细胞器酸化缺陷表现为囊性纤维化和其他病症。Lyso-Tracker Green探针在此类应用上非常广泛有意义。
本品为绿色荧光标记的溶酶体探针,浓度为1 mM(溶于DMSO),最大激发光波长为443nm,最大发射波长为505nm,呈绿色荧光。
使用方法
取出之后,预热试剂至室温,再开盖,短暂离心小瓶,使得微量DMSO液体沉淀瓶底。最佳染色探针的浓度选择取决于不同的实验类型。建议使用一些初始条件进行指导摸索。
1. 用培养基或者其他缓冲液稀释1mM的探针原液,建议使用浓度至少1µM,但为了减少可能的过量,染料浓度应尽可能保证低。
注意:有实验表明如细胞在染色后用无染料的培养基孵育,会看到荧光信号减弱以及细胞出泡现象。
2. 对于贴壁细胞:盖玻片爬片至合适的会合度时,添加37度预热的探针染液,选择合适细胞生长的条件,进行30分钟~2小时的孵育。再用新鲜培养基替换染色液。再选择合适滤光片的荧光显微镜观察细胞,如果细胞没有呈现染色,建议增加标记物的浓度或者增加孵育的时间。
3. 对于悬浮细胞:离心细胞,吸出上清,轻轻用37度预热的含探针的染色液重悬细胞,选择合适细胞生长的条件,进行30分钟~2小时的孵育。再以新鲜培养基离心重悬细胞。再选择合适滤光片的荧光显微镜观察细胞,如果细胞没有呈现染色,建议增加标记物的浓度或者增加孵育的时间。
有效期
-20℃避光保存六个月。
注意事项
1、 适当分装,避免反复冻融。
2、 微量液体使用前请离心,使液体集中于管底。
3、 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶,标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
即 Monodansylcadaverine,单丹磺酰尸胺染色,包括自噬体,所有酸性液泡都被染色,故属于非特异性的。 5. CellTrackerTM Green 染色 主要用于双染色,但其能染所有的液泡,故也属于非特异性的。 自噬相关蛋白定位 在研究自噬相关蛋白时,需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体关系密切,为了区别,常用到一些示踪蛋白在荧光显微镜下来共定位:Lamp-2:溶酶体膜蛋白,可用于监测自噬体与溶酶体融合。LysoTrackerTM 探针:有红或蓝色可选,显示
毒素+FITC 2.标记细胞器荧光探针 (1)线粒体 Mitochondria Rodamin 123 505/534 ,可染活细胞,阳离子性,可检测线粒体膜电位, 且在多数细胞中停留时间短 JC1 线粒体膜电位低时为单体 490/527 发绿光 线粒体膜电位低时为多聚体 490/590 发红光 可标记活细胞线粒体,且为检测线粒体膜电 位最佳探针: Mitotracker Green FM 490/516, 染活细胞或固定
光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。 3、利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成 自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),因此,LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。 (注意:LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力,会造成假阳性。方法2和3需结合使用,同时需考虑溶酶体活性的影响。) 4、检测长寿蛋白的批量降解:非特异
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