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- 武汉金开瑞生物工程有限公司作为一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业，能够承接10余项分子互作技术服务，囊括核酸与核酸、核酸与蛋白、蛋白与蛋白之间相互作用的检测。
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- 2026年01月12日
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- 提供商：
武汉金开瑞生物工程有限公司
- 服务名称：
双分子荧光互补（BiFC）
- 规格：
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服务特色
双分子荧光互补(Bimolecular Fluorescent Complimentary, BiFC)技术是指通过具有相互作用亲和力的两个蛋白质，将分别与其相连的荧光蛋白片段拉近，组装成完整的荧光蛋白，从而表征蛋白质相互作用的发生及其空间位置。
服务介绍
双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescent Complimentary，BiFC）技术基于蛋白质片段互补的原理，用于研究蛋白质间的相互作用。其原理是将荧光蛋白（如绿色荧光蛋白GFP、黄色荧光蛋白YFP等）切割为两个互补但各自不发光的片段（如N端和C端片段），分别与待检测的蛋白质A和B融合表达。当蛋白质A与蛋白质B在细胞内发生相互作用时，荧光蛋白片段靠近并重组为完整的荧光蛋白，从而在显微镜下产生荧光信号，直观地反映了蛋白质间的相互作用。
服务优势
- 活细胞内检测：能够在细胞生理状态下直接观察蛋白质相互作用，保留了时空动态信息。
- 高特异性：只有当目标蛋白相互作用时，荧光信号才会出现，减少了假阳性结果，提高了检测的特异性。
- 多色标记：通过使用不同颜色的荧光蛋白对，可同时检测多个蛋白质相互作用，实现多维度、多层次的蛋白质互作网络研究。
- 直观且定量：通过荧光强度衡量互作程度，可以通过荧光强度定量分析软件进行半定量或定量评估，为研究蛋白质互作的动态变化和强度提供直观且量化的数据。
- 适用于多种生物体系：广泛适用于动物、植物、微生物等生物体系，在植物研究中，尤其适用于研究蛋白质在特定细胞器、细胞结构或特定生理条件下的互作。
- 检测弱或瞬时相互作用：对低亲和力、短暂相互作用敏感，能够揭示一些传统方法难以检测到的相互作用。
服务流程
客户提供
蛋白序列信息
1、客⼾提供载体/模板：需要提供载体mcs测序报告/模板测序结果，如⽆测序报告则需另外收取测序费⽤，由⾦开瑞代为测序。
2、客⼾提供菌液：菌液量应≥0.5mL，放置⼀年以上的⽢油菌需活化后送样。
3、客⼾提供质粒：质粒量≥5μg。
4、菌液和液态质粒均需冰袋运输。
最终交付
- 剩余质粒；
- 阴、阳对照各拍1个视野，2个单分子对照和1个实验组各拍5个视野，每个视野含YFP、Bright field、Merge 3张图；
- 结题报告以及全部原始数据。
服务说明
1、默认在烟草中进行验证，分组如图所示；
2、判定实验成功的标准：阳性对照有荧光，且阴性对照无荧光；
3、在阴阳对照正常的前提下，若实验组检测到荧光，说明两个蛋白能够互作，反之说明不互作。
常见问题与解析 (Q&A)
A：为了确保荧光信号的真实性，需要排除假阳性的可能性。假阳性可能是由于荧光蛋白片段的非特异性相互作用或其他非目标蛋白质之间的相互作用引起的。因此，在实验中应设置对照组，如单独表达荧光蛋白片段或目标蛋白的对照组，以排除非特异性相互作用的干扰。此外，还可以结合其他实验方法，如免疫共沉淀（Co-IP）、共定位、酵母杂交等，来进一步验证蛋白质相互作用。
A：荧光信号较弱可能是由于荧光蛋白片段与目标蛋白的融合效率不高，或者融合蛋白在细胞内的表达量较低。为了优化荧光信号，可以尝试增强启动子，以提高融合蛋白的表达水平。此外，还可以优化转染条件，确保细胞具有较高的转染效率。在制片过程中，应尽可能清理干净叶片表面的杂质，排除气泡，以减少背景干扰。
A：可能的原因有多种。首先，可能是所研究的蛋白质之间确实不存在相互作用，因此无法形成完整的荧光蛋白。其次，可能是荧光蛋白片段与目标蛋白的融合构建存在问题，导致融合蛋白不能正确表达或折叠。此外，实验条件、细胞状态或转染效率等因素也可能影响荧光信号的检测。针对这种情况，建议重复实验，优化实验条件，并检查融合蛋白的表达情况。
A：BiFC技术对实验条件确实有一些特殊要求。首先，温度是影响BiFC实验结果的重要因素。由于该系统对温度敏感，较高的温度可能导致荧光蛋白片段不易互补形成完整的荧光蛋白，因此需要在适当的温度下进行实验。其次，细胞的生长状态和转染效率也会影响实验结果，因此需要控制好细胞的培养条件和转染条件。此外，为了避免背景荧光的干扰，实验过程中需要注意操作细节，如保持实验环境的清洁、避免光线的直接照射等。
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文献和实验4.亚细胞共定位技术 5.噬菌体展示技术（PDT） 6.荧光共振能量转移技术（FRET） 7.双分子荧光互补技术（BIFC） 其中实验室比较常用的研究方法主要是前三种。这里对酵母双杂交技术略作介绍和评述。 原理： 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的转录激活因子GL4有两个独立的结构域 ：N末端的DNA结合域（BD）和C末端的转录激活域（AD）。BD与DNA分子结合，AD激活下游基因的转录，只有两者在空间上充分接近
高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。 十二、目的基因的连接、转化及克隆筛选 （1）总过程：
为了研究 RNA 的功能，通常需要通过反转录过程将 RNA 转化为更稳定的互补 DNA（cDNA）。之后 cDNA 可通过分子克隆、PCR 和测序等技术做进一步的研究。因此，反转录过程是许多 RNA 实验研究流程的关键步骤。 为了获得更为准确的研究结果，本期总结了反转录过程中需要考虑的一些因素，以期能够抛砖引玉，给你的实验研究带来些许帮助。 本期内容 RNA 模板制备 基因组 DNA 的去除 反转录酶选择 引物选择 主要反应组分 反应温度和反应时间 第一链和第二链 cDNA 合成 注
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