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- DM-FAM1031
- 上海
- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6个月
- 保存条件：
2-8°
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 库存：
999
- 规格：
50管/48样
磷脂酶D（ Phospholipases D，PLD ）试剂盒
分光光度法50管/48样
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰胆碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。
测定原理
磷脂酶D催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱，胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质，在500nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅，无水乙醇。
试剂盒的组成
基础试剂：通常为试剂 1（R1）、试剂 2（R2），部分试剂盒可能含试剂 3（R3）等，主要成分包括缓冲液、酶、底物、辅助因子等，需标注各组分的装量（mL / 瓶）或可测试数量。
配套校准 / 质控组分（如适用）：校准品：含被测物标准品，搭配特定基质（如人血清、BSA 等），提供明确靶值，且定值需溯源至国际 / 国家标准品；
质控品：含不同浓度（高 / 中 / 低）被测物，用于验证检测结果准确性，靶值范围为批特异；
配套耗材（如适用）：如塑料滴管、封板膜等，标注具体数量。
注：不同批号试剂盒的各组分不得混用；校准品、质控品的赋值仅适用于本批号试剂盒。
测定步骤
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步骤序号 |
操作步骤 |
操作要点 |
注意事项 |
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1 |
实验准备 |
1. 试剂盒组分（R1、R2、标准品、质控品）室温平衡 15-20 分钟； 2. 处理待测样本（血清 / 血浆 / 匀浆等），按需稀释； 3. 校准微量加样枪，设置酶标仪检测波长 |
1. 试剂避免反复冻融； 2. 样本无溶血、脂血； 3. 吸头一次性使用 |
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2 |
微量加样 |
反应板各孔加样（单孔用量）： - 空白孔：稀释液 20μL + R1 100μL； - 标准 / 质控孔：标品 / 质控品 20μL + R1 100μL； - 样本孔：样本 20μL + R1 100μL；轻1. 严格控制温育温度与时间； 2. 反应板加盖防液体蒸发轻混匀，室温孵育 5 分钟 |
1. 加样顺序不可颠倒； 2. 吸头勿接触孔壁，防止挂壁； 3. 避免试剂交叉污染 |
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3 |
温育反应 |
各孔加 R2 20μL，混匀后 37℃温育 10-15 分钟（按说明书调整） |
1. 严格控制温育温度与时间； 2. 反应板加盖防液体蒸发 |
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4 |
终止反应 |
加终止液 20μL，轻柔混匀 |
1. 终止液为强酸 / 强碱，需戴手套操作； 2. 快速加样，保证各孔反应同步终止 |
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5 |
吸光度测定 |
酶标仪以空白孔调零，测定各孔 OD 值 |
1. 测定前确认孔底无气泡、污渍； 2. 终止反应后 10 分钟内完成检测 |
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6 |
结果计算 |
1. 计算 ΔOD=OD 样本 / 标品 - OD 空白； 2. 以标品浓度为横坐标、ΔOD 为纵坐标绘制标准曲线； 3. 样本浓度 = 曲线查得浓度 × 稀释倍数 |
1. 标准曲线 R²≥0.99； 2. 质控结果需在合格范围内 |
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7 |
实验收尾 |
1. 按生物安全规范处理反应废液2. 剩余试剂密封后冷藏保存； 3. 清洗反应板 / 器材 |
1. 试剂开封后尽快用完； 2. 废弃物分类处置，避免污染 |
生化试剂盒的核心分类
按检测原理和目标物类型，可分为以下几大类，覆盖多数实验场景：
1. 代谢物检测试剂盒用于检测血糖、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、尿酸、乳酸、bing酮酸等小分子代谢物，原理多为终点比色法 / 速率比色法。例如血糖试剂盒通过葡萄糖氧化酶（GOD）- 过氧化物酶（POD）偶联反应，生成有色物质，吸光度与葡萄糖浓度正相关。
2. 酶活性检测试剂盒适用于 SOD、CAT、POD、LDH、ALT、AST 等酶活性测定，以速率法为主。通过监测酶促反应过程中底物或产物的吸光度变化速率，计算酶活性单位（U）。比如 SOD 试剂盒利用氮蓝四唑（NBT）光还原法，SOD 抑制 NBT 还原的程度与酶活性相关。
3. 蛋白定量试剂盒包括 BCA、Bradford、Lowry 法试剂盒，其中微量 BCA 试剂盒适合样本量少的场景。BCA 法基于碱性条件下蛋白与 Cu²⁺结合，还原 BCA 试剂生成紫色复合物，在 562nm 处有特征吸收峰。
4. 离子检测试剂盒用于检测钙、磷、钾、钠等无机离子，如钙试剂盒通过钙与偶氮砷 Ⅲ 结合生成有色络合物，进行比色定量。
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文献和实验真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
方法 1. 外泌体 RNA 如何提取？ 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。 2. 外泌体 RNA 如何定量？ 外泌体 RNA 含量很低，不建议使用微量紫外分光光度计定量，可以使用 Agilent 2100 生物分析仪等定量，也可以直接按最大体积进行逆转录实验。 3. 外泌体做 qPCR 检测应该选什么参照？ 外泌体没有通用的内参选择，可以使用外参（cel
的比吸收系数（均为34.5），也可以在此波长下测定一次光密度（D652）而求出叶绿素a、b总量：CT =（D652 × 1000）/ 34.5 （6）在有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测定出溶液中类胡萝卜素的含量。Lichtenthaler等对Arnon法进行了修正，提出了80%丙酮提取液中三种色素含量的计算公式：Ca = 12.21D663 – 2.81D646
； ②Qubit 准确度更高：蛋白质、游离核苷酸、EDTA 等物质在 260nm 处也存在吸收峰，从而影响紫外分光光度计定量的准确度，而荧光染料仅与目标核酸特异性结合，不受其他杂质影响，qubit 成为精准定量的 「金标准」； ③Qubit 检测范围更精准：紫外分光光度计检测范围较宽（通常 ng/μL-μg/μL），但低浓度（ ④紫外分光光度计操作更简单，成本更低：紫外分光光度计可以直接点样进行定量，无需专业试剂；而 Qubit 法需经加染料、孵育等步骤，再用仪器检测，依赖于专门的染料，仪器价格更贵
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