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- 联祖
- LZ-01X6440
- 国产
- 2025年07月22日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
29
- 英文名：
TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 647)
- 保质期：
半年
- 供应商：
上海联祖
- 保存条件：
-20℃避光保存
- 规格：
20 rxn
| 型号 | LZ-01X6440 |
| 发货周期 | 1～3天 |
| 英文名称 | TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 647) |
| 产品规格 | 20 rxn |
商品描述：
本试剂盒应用范围广，可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒（Alexa Fluor 647）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3′-羟基（3′-OH）末端掺入Alexa Fluor 647-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。Alexa Fluor 647为红色荧光染料，具有很高的稳定性和很强的亮度。
试剂盒组份：
5×Equilibration Buffer——————————1.25 ml
Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
Recombinant TdT Enzyme——————————20 μl
Proteinase K(2 mg/ml)———————————40 μl
产品特点：
1) 需自备用于洗涤细胞的PBS，用于封片的抗荧光淬灭封片液，用于固定的4%多聚。
2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件：
低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)
有效期一年。
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文献和实验的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡，其中 TUNEL 法做的最多，我购买的试剂盒主要是 roche、 promega 公司，结果大多数成功，偶尔也有失败，下面我把实验中的关键问题与大家共享一下，同时也希望能对初学者有所帮忙。 TUNEL 法的实验原理 基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内，在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合，再用 HRP 标记的链霉
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
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