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- 2026年04月22日
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酵母感受态制备与转化试剂盒使酵母转化比目前广泛使用的方案更快捷，更有效，进一步提高了转化效率。用该试剂盒制备的酵母感受态细胞可立即用于转化试验，也可以在-70℃或低于-70℃冷冻保存（缓慢冷冻保存），以备长期使用。该方法适用于环状和线性化DNA。
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文献和实验1、毕氏酵母氯化锂转化法（1）试剂1M LiCl（用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌；必要时用消毒去离子水稀释）50% PEG3350（Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装）2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA）-20℃保存注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化锂有效；PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用；（2）感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris
酿酒酵母感受态细胞的制备 （1）从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基，30℃，250 rpm 培养过夜。 （2）测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。 （3）将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。 （4）在28~30℃摇床中继续培养3~6 hr，使其OD600值达到0.6~1.0。 （5）于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞，弃上清。 （6）用10 ml 洗液洗酵母
实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
