CHO-K1细胞丨CHO-K1仓鼠细胞驯化悬浮细胞株

产品基本信息

细胞名称：CHO-K1 ，仓鼠细胞驯化悬浮细胞株

种属来源：仓鼠

组织来源：卵巢

细胞形态：上皮细胞

细胞驯化前的培养基的培养条件：F12K+10%FBS+1%PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

细胞株驯化：复苏CHO-K1细胞转入T25 cm2细胞培养瓶，以F12K基础培养基添加10%血清培养，待细胞长满单层后，加入 0.25 % 胰蛋白酶消化，传代至装有完全培养基的T25 cm2细胞培养瓶(Corning)中继续培养，当细胞铺满瓶底时，即得贴壁 CHO-K1 细胞。取贴壁CHO-K1 细胞，换液，加入15 mL含血清的完全基和 15 mL无血清CHO-K1专用培养基，2天后吸出一半培养液，加入等量的无血清CHO-K1，每2天重复一次此操作，直到胎牛血清浓度低于 1 %后，以基础培养基B001 继续培养，即培养基中血清浓度依次以 5 %，2 .5 %，1.25%，0.625 %，0 %降低。细胞在无血清CHO-K1专用培养基中密度达到5 ×10^6cells/ mL时，即得悬浮 CHO-K1 细胞。培养条件：37℃，5 % CO2培养箱中静置培养。

培养条件：CHO GROW CD2 培养基98% +GlutaMAX-1谷氨酰胺1%+ps

细胞培养操作

1)复苏细胞：将含有1 mLCHO-K1细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后轻轻吹匀。然后将所有CHO-K1细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将CHO-K1细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜)。第二天换液并检查CHO-K1细胞密度。

2)细胞传代：如果CHO-K1细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将CHO-K1细胞悬液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存：待CHO-K1细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。

b、根据细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使CHO-K1细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。