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Exosupur® small extracellular vesicles purification kit
12个月
北京恩泽康泰生物科技有限公司
2-8℃保存
1ml*1pcs/1ml*4pcs/0.2ml*1pcs/0.2ml*4pcs
规格: | 1ml*1pcs | 产品价格: | ¥1000.0 |
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规格: | 1ml*4pcs | 产品价格: | ¥3800.0 |
规格: | 0.2ml*1pcs | 产品价格: | ¥700.0 |
规格: | 0.2ml*4pcs | 产品价格: | ¥2500.0 |
一、产品介绍:
Exosupur® sEV纯化试剂盒,是基于分子尺寸排阻色谱SEC进行小细胞外囊泡sEV的分离纯化,适用于血浆、血清等成分复杂生物样本,以及微量血浆/血清(200µl)复杂生物样本的外泌体分离纯化,具有纯度高、得率好、方便快捷等优势,是外泌体组学、功能研究的好助手。
针对1ml的常量血浆/血清到0.2ml微量血浆/血清等成分复杂生物样本sEV分离提供系统性解决方案。
二、产品规格:
Exosupur®sEV分离kit-1ml血浆/清排阻柱
规格:ES9P11e & ES9P14e
1)1ml*1pcs,上样1ml*5次重复=5ml,5个样本
2)1ml*4pcs,上样1ml*4根*5次重复=20ml,20个样本
Exosupur®sEV分离kit-微量血浆/清排阻柱
规格:ES9P021e & ES9P024e
1)0.2ml*1pcs,上样0.2ml*5次重复=1ml,5个微量样本
2)0.2ml*4pcs,上样0.2ml*4根*5次重复=4ml,20个微量样本
三、产品概述:
关于外泌体纯化方法,国际细胞外囊泡协会(ISEV)的最小实验要求(MISEV2023)中根据不同的原理进行外泌体分离时,每种方法均有优缺点:
MISEV2023中关于基于试剂盒分离EV的建议
分子尺寸排阻色谱法SEC在诸多分离方法中一骑绝尘,因其优良的性能脱颖而出,获得广大EVs领域专家的青睐,在EVs专刊JEV中的研究占比日益提高。
恩泽康泰开发的基于SEC原理的外泌体分离纯化专利产品——Exosupur®试剂盒,自推出以来经受了市场和EVs领域专家的检验,在操作简便性、性能、稳定性和性价比上获得一致好评。
四、产品应用:
可兼容常量或微量血浆/血清等复杂生物样本;
可用于复杂生物样本的高通量测序、质谱等组学研究,以及下游的PCR、WB、WLISA验证等,纯度更高,杂质干扰更少,定量更准确;
可用于细胞、动物的功能机制研究,不影响外泌体性质和活性、不引入聚集和其他杂质等影响;
可用于工程化外泌体改造后再次纯化等研究;
可用于纯化相关的方法学开发中作为对照方法使用。
五、产品优势:
操作简便:无需特殊设备,柱平衡、上样、外泌体收集、外泌体浓缩4步操作,从上样到分离完成仅需30min;
性能优越:对于常量血浆样本Exosupur®1ml血浆/清排阻柱可回收最高达95%的荧光脂质体,杂蛋白去除率高达99.5%;微量血浆/清排阻柱可回收高达94%纳米颗粒,杂蛋白去除率平均为98%;
稳定性高:只回收固定尺寸范围的外泌体,产物粒径范围窄;实验受外界因素波动的影响比较小;不引入其他的物理化学因素,可以保持完整的外泌体形态和功能;
性价比高:可对排阻柱进行清洗再生,重复5次使用,可处理的样本量大;
质量可靠:Exosupur®系列sEV纯化试剂盒高效便捷,已辅助客户发文70篇+,经受了行业专家的检验,获得北京市新技术新产品认定。
六、性能数据
Exosupur®分离的血浆或微量血浆小细胞外囊泡sEV TEM电镜、WB和nanoFCM粒径表征。
Exosupur®1ml血浆/清排阻柱对于血浆样本可回收高达95%的荧光脂质体,杂蛋白去除率高达99.5%;;微量血浆/清排阻柱可回收高达94%纳米颗粒,杂蛋白去除率平均为98%;
下左图为1ml血浆/清排阻柱(ES9P14e、ES9P11e)分离1mL血浆sEV效果,下右图为微量血浆/清排阻柱(ES9P021e、ES9P024e)分离0.2mL微量血浆sEV的效果。
下第2排图片,Western Blot中可以看出血浆中主要的miRNA结合蛋白更少,杂蛋白更少。高纯度外泌体更有利于RNA组学、蛋白组学及细胞功能学和在体实验研究。
通过分离的血浆sEV particle数与蛋白含量比值评估外泌体纯度,结果显示Exosupur®分离的外泌体纯度更高,杂蛋白含量更低。
数据来自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
对于低表达量的长RNA, Exosupur®能够得到更高丰度的长链RNA,更有利于mRNA + LncRNA研究。
数据来自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
对于miRNA,由于Exosupur®富集的外泌体得率更高、纯度更高,使得富集于sEV的miRNA定量值更高,而非富集miRNA定量值非常低,能够更准确分析sEV来源miRNA。
数据来自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
Protein K和RNase A双酶消化进一步证实了Exosupur®得到的RNA更多的是来源于囊泡,而囊泡外的游离RNA检测值更低。
Exosupur®分离的外泌体进行蛋白质组研究时,可检测到丰富的囊泡特异的标志物蛋白,表明外泌体纯度高,可以更多检测外泌体来源的蛋白;可检测到比较多的蛋白数量,有利于不同样本之间的差异分析;与已发表文章、数据库具有较多overlap,表明数据可靠,能够准确的对外泌体蛋白进行研究。
对比不同的SEC分离方法:经过Exosupur®试剂盒收集的馏分,具有最高的荧光强度(A)和最低的蛋白质浓度(B和C),表明Exosupur®具有最有效的EVs回收率和最低的游离蛋白质污染。
七、常见问题
Q:该试剂盒分离外泌体需要自备的内容有哪些?
A:1)无菌PBS溶液(须用0.22μm滤膜过滤,建议新鲜配置或采购已过膜的PBS,4°C冰箱保存的PBS溶液需先平衡至室温);
2)20%无水乙醇(须超声条件脱气20min或配置好后静置过夜);
3)超滤管(截留分子量100kD);
4)收集管(1.5mL EP管和15mL离心管);
5)样品(上样前需平衡到室温)。
Q:如果是0.5ml左右的血浆样本应该用哪一款试剂盒?
A:直接稀释到1ml上样到Exosupur® ES9P11e/ES9P14e 1ml血浆排阻柱
Q:Exosupur® 微量血浆/清排阻柱的上样0.2ml指的是原始血浆/血清吗?
A:指的是经过低速离心和过0.45 μm滤膜处理后的样本,0.2ml。请注意滤膜过滤会损失约100 μl。如果只用0.2ml血浆进行滤膜过滤建议客户再用约100 μl PBS进行二次过膜润洗。
Q:样本收集完了,颜色还在中间,是否有问题?
A:按照操作说明来做,就没问题,一般是颜色滞后,因为颜色都是小分子成分,会靠后出来,外泌体会先流出,故不能以颜色作为外泌体收集的判断。
Q:用完了是直接用封闭液冲洗,还是2倍柱体积PBS冲了再用1倍柱体积封闭液冲?
A:如果本次接着用就不用封闭液清洗;如果本次不用了,需保存起来下次用,那么本次就用PBS冲洗后再封闭液冲洗。
Q:分离后的外泌体如何保存?
A:外泌体保存问题跟分离方法无关,是由其本身特性决定的,如果条件允许最好使用新鲜的外泌体进行实验,冻存的外泌体容易产生团聚并出现沉淀。实际研究中,外泌体功能实验往往需要大量的外泌体不得不分批提取保存时可-80℃保存;但做biomarker研究时,如RNA组学等,提取外泌体后需尽快完成RNA提取等后续实验。
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